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儿童肺炎支原体呼吸道感染实验室诊断中国
【专家共识】
肺炎支原体(Mycoplasmapneumonia,Mp)是一种常见的病原微生物,主要引起人类呼吸
道感染,尤其以儿童和青年为主。Mp感染广泛存在于世界各地,平时散在性发病,每隔3~7
[1,2]
年出现一次地区流行,每次流行持续1~2年。自2012年全球多地区发生Mp暴发流行,
[3]
除2015年中国外,日本、英国报道的感染病例也出现显著升高。Mp是儿童社区获得性肺
炎(community-acquiredpneumonia,CAP)的重要病原体,可占CAP的10%~30%,Mp
[4]
流行时可增加3~5倍。目前认为,Mp的致病机制是通过黏附及细胞毒效应对呼吸道上皮
[5]
造成直接损伤,也可通过免疫机制引起重症肺炎及其他系统损伤。
[6]
自2000年起,大环内酯类耐药Mp在全球各地流行的证据越来越多,对临床抗菌治疗造
成一定的影响。中国、日本等国家报道的部分地区Mp耐药率已达到90%~100%[7]。重症
Mp肺炎治疗挑战性大,需要早诊断、早治疗,实验室病原学诊断是Mp感染诊断的关键。
由于Mp的特殊病原学特征,实验室检测方法多样,为规范儿童Mp呼吸道感染实验室诊断
程序,提高诊断效率,经中华医学会儿科学会临床检验学组专家讨论,达成并制订儿童Mp
呼吸道感染实验室诊断专家共识。
Mp属于柔膜体纲,支原体属,是能够进行自我复制的、有能力在体外不依靠活体细胞而生
[1]
存的最小微生物。Mp直径125~150nm,长约1~2μm,无细胞壁,仅有细胞膜,革兰染
色阴性。因无细胞壁,Mp呈多形性,其细胞体积小于典型细菌体积的5%,能够通过0.45
μm孔径的细菌滤器,在营养丰富的固体培养基(如SP4培养基)上生长,显微镜下能够看
到Mp的典型菌落。Mp的基因组长度约800000bp[8],包含大约700个蛋白编码基因和一
些非编码DNA序列。核糖体由30S和50S亚基组成,其基因组为环状双股DNA,分子量约
5×108[9]。Mp较小的基因组长度以及有限的生物合成能力限制了其生物合成和代谢能力,需
[10]
要复杂的培养基添加成分才能在体外进行分离培养。Mp生长缓慢,以二分裂方式繁殖,
每6h进行一次分裂,有时需要经过长达数周的生长和(或)多次传代才能获得阳性菌株。
Mp的检测方法主要分病原学检测和血清学检测两大类,需掌握不同检测方法的特点,依据
不同需求和目的选择不同方法。
一、病原学检测
(一)培养法
获取合格的呼吸道标本,用特殊的液体培养基进行3~7d培养,培养基变色后转入固体培养
基继续培养至镜下见到Mp典型菌落或经基因、生化鉴定后判断为Mp阳性。Mp菌株生长
缓慢,需要经过多次传代培养才出现阳性反应,敏感度为34.78%,Mp培养阳性的诊断特异
度接近100%[11],并能对分离株进行种属鉴定、分型及药敏实验,具有重要的临床意义。Mp
专用培养基中必须含有葡萄糖作为代谢底物,同时还应包括血清(作为胆固醇来源)、酵母
提取物以及pH显色剂。推荐使用SP4肉汤及琼脂培养基进行传统法Mp培养。
目前有基于培养方法的快速检测试剂盒,其方法原理是Mp利用试剂中的高营养和快速生长
因子迅速增殖,产酸使试剂pH值降低,通过指示剂颜色变化来判断Mp的存在,或进行药
敏分析。快速培养Mp出现阳性结果的时间较短,6~90h不等,与Mp生长传代时间不符。
有学者质疑这种快速培养法的特异性,认为导致培养基快速出现阳性变色的原因是其他微生
物污染而出现的假阳性。如:患者带菌或在标本采集、
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