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*根据我们所学的知识，你有几种方法把两个DNA片段定向连接起来？先用同种限制性核酸内切酶切，使两段DNA片段中需要连接的一端形成相同的黏性末端；然后再用相应的DNA连接酶将两个黏性末端连接起来。直接用DNA连接酶将两个片段连起来。合适酶切位点及相应的DNA限制酶比较难找连接时没有方向性。PCR后的产物中包括目的基因和引物尾部的碱基对先让我们回顾一下PCR的原理（简化）DNA1DNA2abcdabcda5’3’3’5’3’5’5’3’5’3’3’5’5’3’3’5’5’3’3’5’PCRPCR升温退火d5’3’3’5’定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。延伸添加删除点突变Thinking……其实，不管是碱基对的添加、删除还是点突变，我们都可以将需要突变的部位当成是断开的就行了。添加：将基因中需要添加碱基对的部位看成断开，在引物中加入需要添加的碱基即可删除：将基因中需要删除的碱基对看成没有即可点突变：综合添加和删除，即将基因中需要突变的基因看成没有，将需要的碱基对加入引物中AT给一段DNA:要求：把其中的A-T碱基对定点突变成为G-C碱基对首先：先“去除”A-T碱基，得到两段DNA*
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