体内药物分析第4章 体内药物分析方法的建立与验证.pptVIP

一、文献调研理化性质：在水中溶解，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中几乎不溶，在氢氧化钠试液中易溶；环丙沙星游离体在水中不溶，在乙醇、二氯甲烷中极微溶解，在稀醋酸中溶解。药动学参数吸收过程－空腹口服后吸收迅速，人体生物利用度约为49％～70％达峰浓度（Cmax）－口服500mg后平均为2.4~2.6mg/L；达峰时间（Tmax）－1～2h；蛋白结合率－20％～40％；代谢－口服给药24h内，40％～50％原形、15％以代谢物经肾排出。3.伍用药物的干扰TDM时，考虑患者可能同时服用药物的干扰，比较待测药物、同时服用药物、模拟生物样品和添加同时服用药物的模拟干扰样品的检测信号。确证同时服用药物对分析方法的干扰情况。4.与参比方法的相关性参比方法一般选用特异性强、准确度高、线性关系良好的色谱法。例：茶碱血浆样品用UV法和HPLC法测定结果的相关性24681012142468101214.......Y=－0.107＋0.983X(r=0.9591，n=9)..茶碱血浆样品用UV法测定的结果茶碱血浆样品用HPLC法测定的结果三、标准曲线与线性范围标准曲线：生物样品中所测定药物浓度与响应的相关性，通常用回归分析法（最小二乘法或加权最小二乘法）获得标准曲线。标准曲线通常为线性模式。推荐文献：钟大放，以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题；药物分析杂志：1996，16（5）：343－346线性范围（linearrang）：标准曲线的最高与最低浓度的区间，在线性范围内药物浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。标准系列溶液的制备：用模拟生物样品建立（空白血浆＋待测药物的对准品）注意：建立标准曲线所使用的模拟生物样品应使用与待测的含药生物样品相同生物基质制备。标准曲线的一般建立方法：1.标准系列溶液的制备2.内标溶液的制备3.标准系列模拟生物样品的制备4.标准曲线的绘制注意事项：1.溶剂－水或甲醇2.标准曲线至少含6个浓度点（不包括零点）可覆盖全部待测生物样品的药物浓度。3.标准曲线各浓度点等比梯度模式（比例常数约为2）如：1，2，5，10，20，50，100；实际制备时可先配高浓度依次稀释：100，50，20，10，5，2，1。4.浓度－加入的标准系列溶液的浓度应模拟生物样品中药物浓度的50倍以上，加入量为生物样品总体积2％以下，避免模拟生物样品与实际样品存在较大差异。5.步骤：（1）先加入标准溶液（2）再加入空白生物基质（3）涡旋混匀

6.内标溶液的浓度：加入的内标溶液的浓度应为标准系列浓度的中间浓度7.标准曲线的绘制：以待测药物的检测信号（如色谱峰峰面积或峰高），内标法药物的检测响应应与内标物质检测响应的比值（因变量y）对模拟血药浓度（自变量x）求得回归方程y=ax+b，相关系数（r）。回归方程的截距应接近于零，r≥0.99（色谱法）8.标准曲线的限度要求：药代动力学或生物利用度研究：最高浓度应高于达峰浓度（Cmax）；最低浓度应低于Cmax的1/10~1/20，并应为方法的LOQ例：若体内平均达峰浓度为50ng/ml，其1/20为2.5ng/ml，设定最高浓度为100ng/ml，最低浓度为1ng/ml（个体差异）三、准确度（accuracy）指用该方法测得的生物样品中待测药物浓度与其真实浓度的接近程度通常使用模拟生物样品测定（空白血浆＋浓度已知的对照品溶液），以测得的浓度与添加浓度比较计算。测定法：取空白生物基质数份，在标准曲线范围制备高（接近上限）、中、低（接近LOQ）3个浓度，每一浓度至少5个样品，与随行的标准曲线同法测定，以测得的浓度与加入对照品溶液浓度比较计算。一般用相对回收率（relativerecovery，RR）或相对误差（relativeerror,RE）表示。测定值M，添加量A。限度要求：相对回收率85％～115％（LOQ附近80％～120％）RE