实验1大肠杆菌的培养与分离浙科版选修1课件.ppt

;;;;一、细胞工程

;二、发酵工程

;蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质的DNA编码序列、蛋白质的别离纯化、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质结晶和结构力学分析等。;

酶工程即利用基因工程等手段，改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等;选修1需学习的实验;实验1大肠杆菌的培养和别离;一、根底知识;;1放线菌;链霉素、土霉素、四环素、

氯霉素、红霉素、庆大霉素;2病毒的结构;朊病毒〔蛋白质病毒〕;病毒的增殖：;3真菌;;4细菌的外形与大小;细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌〔纤〕毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;5细菌的营养物质;根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。

自养菌:

异养菌:

腐生菌

寄生菌大局部病原菌;〔二〕培养基;液体培养基：;固体培养基：菌落，菌苔;半固体培养基：;选择培养基;鉴别培养基;;根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。

合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。

优点：标准化生产，组分和含量相对固定;本钱低

缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。;血清中含有：

①多种蛋白质〔白蛋白、球蛋白、铁蛋白等〕

②多种金属离子；

③激素；

④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。

⑤各种生长因子

⑥转移蛋白

⑦不明成分;3.培养基内所含的根本物质;(2)碳源;(3)氮源;不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;3培养基配制原那么：;;;〔１〕消毒定义：;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min

2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min如牛奶的消毒

3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源

4、紫外线消毒

……;灭菌;干热灭菌

160－170℃；1－2h;最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以根本保持培养基的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了???止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。

而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。;;大肠杆菌的培养和别离;3.微生物实验室培养的根本操作程序;二、实验操作;二、实验操作;大肠杆菌的培养和别离实验操作;2、纯化大肠杆菌;1．计算、称量

2．溶化

3．调pH：pH7．6

4．过滤：这一步可以省去。

5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

6．加塞

7．包扎;8．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

9．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

10．无菌检查：

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;;平板划线的操作;不能使用脱脂棉，否那么容易吸水，造成污染。;;微生物的恒温培养;微生物的恒温培养;四、课题成果评价;本卷须知:

1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线屡次.

2.划线首尾不能相接

3.划线后,培养皿倒置培养12~24h;1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？;微生物的恒温培养;微生物的恒温培养;平板划线的操作;不能使用脱脂棉，否那么容易吸水，造成污染。;;四、课题成果评价;〔四〕大肠杆菌的划线别离;问题讨论;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;4.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;涂布别离法;涂布别离法;涂布平板操作;划线别离法和涂布别离法哪个更好呢？;别离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一;〔五〕大肠杆菌别离后保存;1.如何操作才可以尽量防止被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;3.进行恒温培养时为什么要将培养皿