鼠伤寒沙门菌cpxR和tolC双基因缺失株的构建及其对抗菌药物敏感性分析.pptxVIP

鼠伤寒沙门菌cpxR和tolC双基因缺失株的构建及其对抗菌药物敏感性分析汇报人：2024-01-24

CATALOGUE目录引言鼠伤寒沙门菌概述cpxR和tolC基因功能及作用机制双基因缺失株的构建与鉴定抗菌药物敏感性分析结果讨论与意义分析实验材料与方法

01引言

鼠伤寒沙门菌是一种常见的食源性病原菌，可引起严重的胃肠道感染，对人类健康造成威胁。cpxR和tolC基因在鼠伤寒沙门菌中具有重要的生理功能，与细菌的毒力、耐药性等密切相关。研究cpxR和tolC双基因缺失株的构建及其对抗菌药物的敏感性，有助于深入了解鼠伤寒沙门菌的致病机制和耐药机制，为临床治疗和药物研发提供理论支持。背景与意义

03评价cpxR和tolC双基因缺失株的毒力变化，探究其在鼠伤寒沙门菌致病过程中的作用。01构建鼠伤寒沙门菌cpxR和tolC双基因缺失株，并验证其缺失效果。02分析cpxR和tolC双基因缺失株对抗菌药物的敏感性变化，探讨其耐药机制。研究目的

ABCD技术路线通过PCR、测序等方法验证cpxR和tolC基因的缺失效果。利用分子生物学技术构建cpxR和tolC双基因缺失株，包括基因敲除、质粒构建、转化等步骤。利用小鼠感染模型评价cpxR和tolC双基因缺失株的毒力变化。采用药敏试验等方法分析cpxR和tolC双基因缺失株对抗菌药物的敏感性变化。

02鼠伤寒沙门菌概述

革兰氏阴性菌鼠伤寒沙门菌是一种革兰氏阴性菌，具有典型的肠道病原菌的形态和生理特征。兼性厌氧菌该菌是一种兼性厌氧菌，能够在有氧和无氧环境下生长。生化反应特性鼠伤寒沙门菌能够发酵葡萄糖、甘露醇等多种糖类，产生酸和气体。同时，该菌还具有还原硝酸盐、水解明胶等生化反应能力。鼠伤寒沙门菌生物学特性

临床表现感染鼠伤寒沙门菌后，患者可出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状，严重者可导致脱水、休克甚至死亡。流行情况鼠伤寒沙门菌感染呈全球性分布，尤其在发展中国家和地区，由于卫生条件较差，感染率较高。感染途径鼠伤寒沙门菌主要通过污染的食物和水源传播，引起人类和动物的胃肠道感染。鼠伤寒沙门菌感染现状

鼠伤寒沙门菌耐药性问题鼠伤寒沙门菌的耐药性不仅增加了治疗的难度和成本，还可能导致治疗失败和病情恶化，对患者的生命健康造成严重威胁。耐药性的影响随着抗菌药物的广泛使用，鼠伤寒沙门菌的耐药性问题日益严重。目前，该菌已对多种抗菌药物产生耐药性，如氨苄西林、氯霉素、四环素等。耐药性现状鼠伤寒沙门菌的耐药机制主要包括药物外排泵的表达、药物作用靶位的改变以及外源性耐药基因的获取等。耐药机制

03cpxR和tolC基因功能及作用机制

cpxR基因编码CpxR蛋白，是鼠伤寒沙门菌中的一种重要转录调节因子。CpxR蛋白通过感应细胞内膜应激，调控一系列基因的转录，以应对不良环境。cpxR基因缺失会导致鼠伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性增加，因为CpxR蛋白参与调控药物外排泵的表达。010203cpxR基因功能及作用机制

tolC基因功能及作用机制01tolC基因编码TolC蛋白，是鼠伤寒沙门菌中的一种外膜通道蛋白。02TolC蛋白参与多种药物外排泵的形成，协助药物从细胞内排出，降低药物在细胞内的浓度。tolC基因缺失会导致鼠伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性增加，因为药物外排泵的功能受损。03

cpxR和tolC基因在鼠伤寒沙门菌中的相互作用cpxR基因通过调控tolC基因的表达，影响药物外排泵的形成和功能。02在cpxR和tolC双基因缺失株中，药物外排泵的功能严重受损，导致鼠伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性显著增加。03研究表明，cpxR和tolC双基因缺失株的构建有助于深入了解鼠伤寒沙门菌的耐药机制，并为抗菌药物的开发提供新的思路。01

04双基因缺失株的构建与鉴定

选择合适的鼠伤寒沙门菌菌株作为出发菌株，设计针对cpxR和tolC基因的特异性引物。利用PCR技术扩增cpxR和tolC基因上下游同源臂，通过融合PCR技术将抗性基因与同源臂连接，构建打靶载体。将打靶载体转化入鼠伤寒沙门菌感受态细胞中，通过同源重组的方式将抗性基因插入到cpxR和tolC基因位置，实现双基因缺失。构建策略与方法

利用抗性基因对应的抗生素进行初步筛选，挑取单菌落进行PCR验证，确认cpxR和tolC基因是否被成功敲除。通过比较野生型菌株与缺失株的生长曲线、菌落形态等表型特征，进一步验证缺失株的构建是否成功。对PCR验证正确的菌株进行测序分析，进一步确认缺失株中cpxR和tolC基因的缺失情况。缺失株的筛选与鉴定

将缺失株在无抗性压力的培养基中连续传代多次，观察其生长情况并提取基因组进行PCR验证，分析缺失株的遗传稳定性。将缺失株接种到小鼠模型中，观察其在动物体内的生长情况和毒力变化，评估缺失株的遗传稳定性和安全性。通过比较不同时间点收集的缺失株样本中cp