迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101455839A

(43)申请公布日2009.06.17

(21)申请号CN200810151125.9

(22)申请日2008.09.26

(71)申请人中国人民解放军第四军医大学

地址710032陕西省西安市长乐西路17号

(72)发明人秦红黄威权金晓航刘玉林张欣刘子冬

(74)专利代理机构陕西电子工业专利中心

代理人程晓霞

(51)Int.CI

A61K39/395

C12N15/31

A61P31/04

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工

程疫苗及其制备方法

(57)摘要

本发明提供了一种迟缓爱德华菌抗

独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法，

采用RT－PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独

特型单克隆抗体杂交瘤细胞株中克隆出V

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

未缴年费专利权终止IPC(主分

类):A61K39/395专利

2022-09-20号:ZL2008101511259申请专利权的终止

日权公告

日

权利要求说明书

1.一种迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其特征在于：利用迟缓爱德华菌

抗独特型抗体的杂交瘤细胞株克隆出重链(VsubH/sub)和轻链(VsubL/sub)

可变区基因，用(Glysub4/subSer)sub3/sub组成的连接肽(linker)连接

VsubH/sub和VsubL/sub，构建VsubL/sub-Linker-VsubH/sub形

式的单链抗体scFv基因，在大肠杆菌中表达，获得迟缓爱德华菌抗独特型抗体基

因工程疫苗，其基因序列和氨基酸序列如下：

2.一种迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其特征在于：构建单链抗体scFv

基因的引物序列为：

VsubL/subback：5’-GTGCAGAATTCGTCTTGACCCAAACT-3’

VsubL/subfor：5’-

ACCGCCGGATCCACCGCCACCCGAGCCACCGCCACCTTTTATTTCCAG

CTTGGTCCC-3’

VsubH/subback：5’-

GGCTCGGGTGGCGGTGGATCCGGCGGTGGCGGTTCGGAGGTTCAGCT

GCAG-3’

VsubH/subfor：5’-GCAGAAGCTTGCGGCCGCTTATGAGGAGACTGTGAG-3’

3.实现权利要求1所述迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗的制备方法，其特

征在于：具体的步骤如下：

一.应用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株中克

隆出重链(VsubH/sub)和轻链(VsubL/sub)可变区基因；

二.在重链(VsubH/sub)和轻链(VsubL/sub)可变区基因之间引入连接肽

(Glysub4/subSer)sub3/sub，体外构建单链抗体基因；

三.将其克隆至原核表达载体pET28a，构建原核表达质粒pET28a—scFv，筛选阳性

克隆，将鉴定正确的质粒转化到大肠杆菌BL21中进行诱导表达：挑取转化的单克

隆菌落接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中，220r/min，37℃培养过夜，次日以

1∶100转接，在220r/min，37℃条件下振荡培养至Asub600/subnm＝0.4～0.6，

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