HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解).pdfVIP

1液相色谱基础知识

1.1液相色谱名词术语

Mobilephase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为

固定相，一相为流动相。流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）

向前移动的那一相。

Stationaryphase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移

动的那一相。

Gradientelution:梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流

动相的浓度配比,使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各

自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

Detectionwavelength：检测波长，

retentiontime：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该

组分浓度极大值时的时间

Peak:峰

PeakBase：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器

测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴

PeakHeight：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。

PeakWidth：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的

距离

PeakWidthatHalfHeight：半峰高宽

PeakArea：峰面积

TailingPeak:后沿较前沿平缓的不对称峰

LeadingPeak:前沿较后沿平缓的不对称峰

GhostPeak:假峰，并非由试样所产生的峰

BaselineDrift:基线漂移

BaselineNoise:基线噪音

BandBroadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象.

1.2流动相

1.2.1流动相类型

正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极

性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为

相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、

异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离

中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），

极性小的组分先出柱。

反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流

动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等

与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱

的化合物，极性大的组分先出柱（现在大部分液相用的是反相色谱

法）。

1.2.2流动相注意事项

1.2.2.1pH值的选择

C18和C8使用的流动相pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的

pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。

1.2.2.2滤膜的使用

对于盐类等试剂，或者没有色谱纯的试剂，可以使用分析纯的，

但是在使用前需要用0.45um或0.22um的滤膜过滤。盐类试剂最好现

配现用。

使用滤膜时应注意：有机膜能滤水系，水系膜不能滤有机。如果

流动相是有机溶剂的比例，那么就应该用有机膜过滤（但是如果是梯

度进流动相的话，盐溶液可先单独用水膜过滤）

水膜：

纤维素微孔滤膜，易溶于丙酮等中等极性有机溶剂，不易燃烧，可用

于空气测定之用，亦可用于乙醇或水液体过滤。

纤维素膜:

a)醋酸纤维素膜：可过滤低分子量的醇类、水溶液、酒类、油类。

b)硝酸纤维素膜：适用于水溶液、空气、油类、酒类过滤。不耐酸

碱，溶于有机溶剂。可进行热压灭菌。

c)醋酸纤维与硝酸纤维素混合酯膜：性质类硝酸纤维素膜。但可适

用于PH值3～10范围，10％～20％的乙醇，50％的甘油，30％～50％

的丙二醇等，而2％聚山梨酯80对膜有显著影响。

微孔滤膜使用前，应进行清洗处理，用蒸馏水浸泡洗净后装于滤

器内，有机溶剂的过滤则用乙醇浸泡清洗。色谱样品或试剂的过滤，

若是水系的，蒸馏水洗净浸泡后，再蒸馏水预过滤，若有机系过滤，

最好先将本品在纯甲苯和95%以上的乙醇中分别浸泡过夜，再纯甲苯

和纯乙醇预过滤，彻底洗净膜后使用。

微孔滤膜正反：

a)各向同性，不分正反面，对额定孔径以上固体微粒能起到绝对截

留的作用。

b)有正反面，亮光强的为反面，亮光弱的为正面，膜内孔径从正面

到反面逐渐递减。使用时应将正面对着待滤液，即待滤液从亮光弱的

一面流入，滤净液从亮光强的一面流出，欲截留微粒相当于经历了孔

径从大到小多层滤膜的阻截而不易堵塞，可显著延长使用寿命。使用

时应在膜处理前认好正反面，（光线从侧面照膜可以比较出），作上

记号，入水后正面将难以分辨。

有机膜尼龙（聚酰胺）微孔滤膜

材料为脂肪族