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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN101134941A
(43)申请公布日2008.03.05
(21)申请号CN200710044314.1
(22)申请日2007.07.27
(71)申请人东华大学
地址201620上海市松江区松江新城区人民北路2999号
(72)发明人洪枫钟坤
(74)专利代理机构上海泰能知识产权代理事务所
代理人黄志达
(51)Int.CI
C12N1/14
C12N9/14
C12P7/42
C12R1/69
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
米曲霉高效制备EGCG水解酶及生
产EGC和没食子酸的方法
(57)摘要
本发明涉及一种用表没食子儿茶素
没食子酸酯(EGCG)诱导米曲霉高效生产
EGCG水解酶，包括：(1)将米曲霉种子培
养基在25－30℃，100－250r/min条件下培
养36小时；(2)以4－10％接种量转接至含
EGCG的发酵培养基中，在25－30℃，
100－250r/min条件下培养48－120小时，
过滤，离心得酶液；用该酶将EGCG水解
转化为表没食子儿茶素(EGC)和没食子
酸，包括：(1)构建EGCG酶水解反应体
系、酶液空白体系和底物空白体系；(2)反
应体系和空白体系在25－60℃，反应0－
48小时或直至水解反应基本结束才停止；
(3)利用高效液相色谱和薄层层析分析底物
和产物。本发明EGC转化率和得率高，产
物稳定易分离，且安全环保，操作简单，
可控性强，适合工业化大规模生产。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种高效诱导米曲霉制备EGCG水解酶的方法，包括下列步骤：
(1)将米曲霉种子培养基在25-30℃，100-250r/min条件下培养36小时；
(2)以4-10％接种量转接至含EGCG的发酵培养基中，在25-30℃，100-250r/min
条件下培养48-120小时，过滤，离心得酶液。
2.根据权利要求1所述的一种诱导制备EGCG水解酶方法，其特征在于：所述的米
曲霉是食品工业用安全菌种。
3.根据权利要求1所述的一种诱导制备EGCG水解酶方法，其特征在于：所述的
EGCG原料采用不同的纯度。
4.根据权利要求1所述的一种诱导制备EGCG水解酶方法，其特征在于：所述的培
养产酶过程是间歇式的、分批补料式或连续培养式。
5.一种利用EGCG水解酶生产EGC和没食子酸的方法，包括下列步骤：
(1)构建EGCG酶水解反应体系、酶液空白体系和底物空白体系；
(2)反应体系和空白体系在25-60℃，反应0-48小时或直至水解反应结束才停止；
(3)利用高效液相色谱和薄层层析分析底物和产物。
6.根据权利要求5所述的一种利用EGCG水解酶生产EGC和没食子酸的方法，其
特征在于：所述的EGCG酶水解反应体系是EGCG底物、
EGCG水解酶和pH3-7缓冲液体系，酶液空白体系是EGCG水
解酶和pH3-7缓冲液体系，底物空白体系是EGCG底物和pH3
-7缓冲液体系。
7.根据权利要求5所述的一种利用EGCG水解酶生产EGC和没食子酸的方法，其
特征在于：所述的EGCG底物采用不同的纯度。
8.根据权利要求5所述的一种利用EGCG水解酶生产EGC和没食子酸的方法
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