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食品中蔗糖的测定方法酶－比色法

食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他

糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶-比色法是在检索了近20年148

篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(β-果

糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。

蔗糖酶解后的产物-葡萄糖的测定方法，与GB／T16285－96保持一致。

食品中蔗糖的测定方法GB／T16286-96

酶－比色法

1范围

本标准规定了用酶－比色法测定食品中蔗糖的方法，适用于各类食品中蔗糖的测定。

本标准最低检出限量为0.04μg(蔗糖)／mL(试液)。

2原理

在β－果糖苷酶(β－FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD)

在有氧条件下，催化β－D－葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D－葡萄糖酸－δ－

内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4－氨基安替比林和苯酚生成红

色醌亚胺。在波长505nm处测定醌亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。

β－FS

CHO＋HO────CHO(G)＋CHO(F)

122211261266126

GOD

CHO(G)＋O────CHO＋HO

61262610622

POD

HO＋CHOH＋CHNO────CHNO＋HO

226511133652

3试剂

3.1组合试剂盒

1号瓶：内含β－果糖苷酶(fructosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠；

2号瓶：内含0.2mol／L磷酸盐缓冲液(pH＝7.6)200mL，其中含4－氨基安替比

林0.00154mol／L；

3号瓶：内含0.022mol／L苯酚溶液200mL；

4号瓶：内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)800U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，

peroxidase)2000U(活力单位)。

1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。

3.2酶试剂溶液

3.2.1将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使

酶完全溶解。此溶液即为β－果糖苷酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol／L，

pH＝4.6。在4℃左右保存，有效期一个月。

3.2.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。

3.2.3将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，

即为葡萄糖氧化酶－过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存，有效期一个月。

3.30.085mol／L亚铁氰化钾溶液

称取3.7g亚铁氰化钾[KFe(CN)·3HO，GB1273，分析纯]，溶于100mL重蒸馏水中，

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摇匀。

3.40.25mol／L硫酸锌溶液

称取7.7g硫酸锌(ZnSO·7HO，GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。

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3.50.1mol／L氢氧化钠溶液

称取0.4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。

3.6蔗糖标准溶液

称取经100±2℃烘烤2h的蔗糖(HG3－1001，分析纯)0.4000g，溶于重蒸馏水中，定容

至100mL，摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00－－V100，即为400μg／mL蔗糖标准

溶液。

4仪器和设备

实验室常规仪器及下列各项：

4.1研钵或粉碎机。4.2分析筛。4.3组织捣碎机。4.4恒温水浴锅。4.5可见光分光光度计。

4.6微量移液管:1.00mL，精度0.01mL。

5试样的制备5.1固体样品

粉末状样品:取有代表性的样品至少200g