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药物敏感试验

1.药物敏感试验种类

1.1纸片琼脂扩散法（discagardiffusiontest）常采用Bauer-Kirby）

法。

1.2液体稀释法（dilutiontest）：肉汤稀释法（brothdilution）和

琼脂稀释法（agardilutiontest），肉汤稀释法又包括试管稀释法（tube

dilution）和微量稀释法（microdilution）。

2.应用

2.1纸片琼脂扩散法：

2.1.1术语：

敏感——表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌

药物治愈，禁忌症除外。

耐药——被测菌株不能被常用剂量所达到的组织内或血液中的

抗生素所抑制。

中度敏感——表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在生理

性浓集的部位被抑制，如β-内酰胺类药物。

中介度——这一范围只是抑菌圈直径介于敏感和耐药之间的缓

冲域，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误，

抑菌圈落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可以替代的药物，

应重复或以稀释法测定MIC。

2.1.2应用：一般认为药敏结果与临床约有80~90%合格率，药

敏实验是提供治疗感染性疾病最有力的依据，也可以进行流行病学调

查，了解耐药菌株的耐药机制。此外利用药敏谱可对被检菌株进行鉴

定。

2.2液体稀释法（dilutiontest）

2.2.1术语：

MIC——最小抑菌浓度

MBC——最小杀菌浓度

MIC50——能抑制50%的试验菌的最低药物浓度即为该药物对被测

菌的MIC。

MIC90——能抑制90%的试验菌的最低药物浓度即为该药物对被测

菌的MIC。

2.2.2应用：液体稀释法比较繁琐，一般不作为常规试验。仅在

以下几个方面采用：调查罕见耐药，调查药敏定性试验是敏感但临床

疗效不佳的原因，确定中介度的敏感性，有效的选择二线药，评价新

药。

3.影响药敏性试验准确性的因素

3.1细菌的分离培养

综合动物的临床发病症状，剔除并避免选用少量杂菌。选取5份

以上菌落，平板划线于血平板上，或根据实验要求划线于不同的鉴别

培养基，再培养。从而达到分离培养的目的，如常用的肠道菌的分离

选择S.S琼脂和麦康凯琼脂。

3.2培养基选择

培养基成分不同，不但影响着敏感菌株的生长繁殖，并可影响到

抑菌圈的直径。培养基内容物质越高，细菌的繁殖越快，数量越多。

一般细菌如肠道杆菌及葡萄球菌等可用普通营养琼脂，链球菌、

巴氏杆菌或肺炎球菌等可用绵羊血琼脂平板。测定磺胺类药物敏感试

验时，应选用无蛋白胨琼脂平板，因为胨能使磺胺失去作用。含血液

成分的血汤、血平板会使金霉素、中药提成制剂的作用减弱。氯化钠

琼脂中的钙、镁浓度越高，对链霉素、新霉素抑菌圈越少。为此，操

作过程中应注意琼脂平板选取。

3.3琼脂平板中琼脂含量高低及琼脂层厚薄，亦影响抑菌圈大小。

为此，浇注时，控制在2~4mm，以3mm为最佳。

3.4器材准备

药敏试验是利用微生物的方法，所用剂量精确到微克、微升计算，

称量天平、移液器、习惯必须精确，培养箱内光线、温度恒定。所用

设备预先消毒、灭菌干燥后备用。

3.5培养时间

细菌在发育过程中，以对数期繁殖最快，活力最强，后处于衰弱

期，为此，可根据试验的需要，培养时间选择在18~20小时为宜，

尽量不超过24小时。时间越长，细菌逐步衰退，敏感性降低，抑菌

圈直径反应不清晰。

3.6划线

将已熔化的琼脂培养基冷却到60℃左右，加入已灭菌的培养平

皿中制成平板。凝固后，挑取筛选培养10~18小时的幼龄菌，用接

种环在培养基表面进行熟练划线。如此反复多次不同方向划线，使整

块琼脂表面均匀布满细菌。划线方法很多，可以参照个人习惯选择应

用，但注意，划线要均匀，不要划破培养基。

3.7标准菌样及被检药物

标准菌样应是来自同一地、同一批饲养动物的样品。被检药物

按预防、治疗剂量分别稀释。且药物在有效期内，无氧化、潮解等现

象，操作时应按相同的方法和相同条件进行，以避免人为因素造成操

作误差。

3.8对照组

培养基、药物试剂和试验方法等