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HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用进展

强，如中药汤剂、注射剂的分析等；(5)是应用面广。

HPCE除可分析小分子酸、碱、盐及中性分子外，还可分析生物大分子(核酸、多肽和蛋白质等)及手性分子等。因此，HPCE法可以完成中药指纹图谱研究的诸多课题。本文就已有的HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用方法上作以下总结。

1样品的提取

1.1提取方式

(1)超声法以醇或水为提取溶剂超声提取。

(2)回流法该法多应用于植物药，尤其是多糖类成分的样品提取。其中，丹参多糖的提取兼用了超声和回流两种方法。多糖除蛋白的方法中，狗脊多糖和榧子多糖样品采用的是85%乙醇、无水乙醇和丙酮除蛋白。

(3)提取液法该法主要是针对样品蛋白类成分的提取，专属性较强，为3种蛋白提取液，Tris-甘氨酸蛋白提取液：Tris016g，甘氨酸2188g，加蒸馏水溶解至1000mL。碱性蛋白提取液：Tris-Hcl011mol/L，011%抗坏血酸，巯基乙醇10mmol/L，pH810。酸性蛋白提取液:柠檬酸80mmol/L，Na2HPO432mmol/L，抗坏血酸5mmol/L，巯基乙醇10mmol/L，pH218。其中，可采用酸性蛋白提取液提取了参照物吴茱萸碱[1]。此外，蛋白类成分也有其他的提取方法，如蒙古黄芪多肽[2]：4e条件下浸泡提取并用硫酸铵沉淀。太子参中环肽PseudostellarinB[3]：以甲醇为溶剂，超声辅助提取。以上所述的3种提取方式，不难看出超声提取法的应用更为广泛，考察不同提取方法对提取效率的影响，发现超声法与回流法提取效率相当，但回流法操作复杂，且加热过程中可能会引起药物组分的变化，而超声法简便省时，因而选用超声法进行提取更可行。

1.2提取溶剂一般为水、甲醇、乙醇等极性大的溶剂，其加入体积及浓度需要具体的实验考察。

1.3提取时间超声法的提取时间通常较短，一般在30~90min。而回流法的提取时间较长，大约在115~215h左右，索式回流提取[14]时间5h，回流加热前药材大多需要浸泡以便提取更加充分。

2电泳条件的选择

通常电泳条件主要包括:毛细管规格、背景电解质种类与浓度、电压、柱温、进样方式、检测器等。其中背景电解质的选择尤其重要，主要是缓冲盐的种类、缓冲溶液的浓度及pH等。分述如下。

2.1毛细管规格常用内径50Lm或75Lm的石英毛细管，有效长度一般在40~60cm左右，总长度约50~67cm。

2.2背景电解质电解质的种类、浓度及pH对分离的影响较大，因为它直接影响电渗淌度，通常在实验当中要对其进行至少5个水平的实验考察。

(1)电解质的种类一般为磷酸盐或硼酸盐的缓冲溶液，也有硼酸盐和磷酸盐混合体系，也有采用了1mmol/LTris-10mmol/LH3BO3-015%四乙烯五胺-01025mmoL/LCTAB体系为缓冲体系[4]。为改善电泳峰的峰形及分离情况，有时会在缓冲溶液中加入有机改性剂。

(2)电解质的pH值在pH9的硼砂缓冲液中电渗速度约为2mm/s，而在pH3的背景电解质中电渗速度约减小1个数量级。因此，背景电解质的pH值通常要大于7。当然有时在分析时会用酸性电解质，如对海马类药材蛋白质的分析就可用pH3.5的缓冲液[5]。

2.3电压范围在10KV~30KV。

2.4进样方式压力进样、重力进样、虹吸进样和电动进样。

2.5检测器一般是紫外检测器，分为可调波长检测器(VWD)与二极管阵列检测器(DAD)两类。

3参照物的选择

3.1对照品内标物及内参比峰的选择

（1）通常选择药材或者制剂的活性成分，如阿魏酸和吴茱萸碱，或指标成分如绿原酸[6]。复方中药注射剂中的君药的活性成分或指标成分的一个或多个单体作为参照物，要求参照物在毛细管电泳图谱上的电泳峰较大且无干扰。

（2）若存在适宜的内标物，可用内标物标定和考察其它电泳组分，如厚朴酚、对乙酰氨基酚和槲皮素。

（3）若无适宜的内标物或电泳图谱上无位置插入内标峰，也可选择电泳图谱上无干扰的迁移时间与峰高适宜的电泳峰为内参比峰。用内参比峰替代内标峰，进而标定和考察其它电泳组分，如僵蚕和太子参的指纹图谱研究[7]。

（4）若按所分析成分的种类看，多糖类成分的参照物一般选择鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、果糖、阿拉伯糖等单糖，并且这些单糖需要进行A-萘胺衍生化，如丹参多糖、野西瓜成熟果实中的多糖和羊栖菜多糖[8]组分的分析。而蛋白质类成分的参照物选择牛血清白蛋白[9]。核苷类成分则选择腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤等核苷作为参照物。

3.2参照物溶液的制备制备参照物溶液所使用的溶液同供试品溶液的要求。

4数据处理

4.1方法学考察