分子生物学技术.pptx

分子生物学技术当前缺乏标准化方法WHite利用实时定量PCR方法对203例血液病患者全血标本进行曲霉检测，结果发觉在确诊/高度拟诊患者中，阳性率为92.3%;与G试验和GM试验及高分辨CT有良好一致性分子生物学技术第1页

分子生物学技术台湾学者利用液相芯片技术，基于全部真菌高度保守序列如18S、28S和高度可变内部转录间隔区(ITS)，前者用于筛选真菌感染，后者用于菌种确实定，同时对64种真菌进行判定，敏感性和特异性均大于97%，1天内完成JClinMic,43:3760-3768分子生物学技术第2页

分子生物学技术存在问题1.外来污染2.不能有效地域分定植和感染3.不能指导临床何时开始及停顿抗真菌治疗分子生物学技术第3页

真菌病理检验分子生物学技术第4页

真菌病理检验PAS阳性念珠菌菌丝分子生物学技术第5页

真菌病理检验HE染色真菌菌丝分子生物学技术第6页

真菌病理检验肺隐球菌PAS阳性分子生物学技术第7页

组织病理学检验侵袭性曲霉感染：－侵犯血管，引发病变部位栓塞、出血及坏死－非特异性炎症、化脓性改变或肉芽肿形成分子生物学技术第8页

组织病理学检验组织内曲霉：－镜下菌丝常呈45°分枝、有隔、透明且粗细均匀,直径约3～6μm,有菌丝重复分枝现象，排列成放松射状或珊瑚状。－有些慢性损害中菌丝常呈不规则扭曲状－特征性菌丝：诊疗曲霉感染最可靠依据分子生物学技术第9页

组织病理学检验HE染色呈蓝色略带红色，PAS染色呈红色嗜银染色呈黑色菌丝横切面与孢子判别：－孢子往往成群分布，直径小于菌丝分子生物学技术第10页

曲菌菌丝分子生物学技术第11页

甲胺银染色:曲霉球(烟曲霉)分子生物学技术第12页

毛霉菌试验室诊疗与外界相通部位分离出毛霉菌不一定有意义无菌部位标本阳性培养有意义支气管肺泡灌洗液直接镜检—惯用分子生物学技术分子生物学技术第13页

真菌药敏判断标准解读分子生物学技术第14页

抗真菌药品敏感试验过去试验方法及存在问题液基稀释法(brothdilution)微量液基稀释法(brothmicrodilution)琼脂混正当（agarincorporation）（即过去广泛使用药基法）琼脂扩散法(agardiffusion)问题：影响原因过多，结果重复性差分子生物学技术第15页

美国国家临床试验室标准委员会（NCCLS）方案1982年起美国国家临床试验室标准化委员会（NCCLS）组织教授进行了一系列试验。1992年：NCCLSM27P文件……对念珠菌和隐球菌液基稀释法提出药敏测试标准化方法，属提议性质。1995年：NCCLSM27T文件，属试验性质。1997年：NCCLSM27A文件，属确认性质，加入了微量稀释法1998年：NCCLSM38－P文件…丝状菌微量液基稀释法提案分子生物学技术第16页

NCCLSM27-A方案酵母菌液基稀释法抗真菌药敏试验参考方案（ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofYeasts）已同意标准方法，包含微量稀释法（microdilution)主要适合用于：念珠菌和新生隐球菌年出版了M27-A2方案分子生物学技术第17页

NCCLSM38-P方案产孢丝状真菌液基稀释法抗真菌药敏试验参考方案（ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofConidia-FormingFilamentousFungi）提出标准方法，微量稀释法主要适合用于：如曲霉、镰刀菌、米根霉、波氏假阿利什霉、申克孢子丝菌（菌丝相）等。我们已依据此法，进行了皮肤癣菌药敏试验年推出M38-A方案分子生物学技术第18页

M44-A方案年CLSI出版了对酵母菌纸片扩散法抗真菌药品敏感试验参考方案使用美蓝MH琼脂平板，纸片为Rosco企业生产各种抗真菌药品纸片分子生物学技术第19页

M27-A2药敏判读对于酵母菌（念珠菌、新型隐球菌，不适合用于其它真菌）：氟康唑:35度、40-50h(隐球菌70-74h)，与生长对照菌比较80%受抑制为判定点如MIC≤8μg/ml汇报敏感，≥64μg/ml汇报耐药，16-32μg/ml则是剂量依赖敏感光滑、克柔不适用分子生物学技术第20页

M27-A2药敏判读伊曲康唑MIC定义同氟康唑如MIC≤0.125μg/ml,提醒受试黏膜感染