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《分子生物学常用实验技术》课堂练习题参考答案

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一、填空题。

在用SDS分离DNA时，要注意SDS浓度，0.1%和1%的SDS作用是不同的，前者，后者。

SDS是一种提取DNA时常用的阴离子去污剂，它可以溶解膜蛋白和脂肪，使细胞膜和核膜破裂，使核小体和核糖体解聚，释放出。它还可以使蛋白质变性沉淀，也能克制。

在分离DNA时，需要带手套操作，是由于。

用酚-氯仿抽提DNA时，通常在氯仿或酚-氯仿中加入少许异戊醇，这是由于有机溶剂异戊醇可以。此外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白质相和下层有机溶剂相维持稳定。

在分离DNA时，要用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸等，其目的是：。

在DNA分离过程中，导致DNA分子断裂的因素很多，重要有：、和

。

在分离DNA时，常用酸变性、碱变性、热变性和来去除蛋白质。

用乙醇沉淀DNA的原理是：。

用乙醇沉淀DNA时，通常在DNA溶液中加入单价阳离子，如氯化钠和乙酸钠，其目的是。

通常可在3种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃和-70℃，其中以℃为好。

浓缩DNA的方法通常有：包埋吸水法、蒸发法、膜过滤法和。

碱裂解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用方法，两者的原理不同，前者是根据，后者是根据。

在技术中，DNA限制性酶切片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素薄膜上，然后与放射性标记的DNA探针杂交。

SSC是氯化钠和柠檬酸钠组成的试剂，其中前者作用是：，后者的作用是：。

在southern杂交中，DNA转移的速度取决于、和。

在重蒸酚中加入1%的8-羟基喹啉及少量β-巯基乙醇，不仅可以防止酚氧化，还可以克制

活性以及。

RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）上，同一放射性DNA探针杂交的技术称__。

根据Northern杂交结果可以说明__。

cDNA技术是进行真核基因克隆的一种通用方法，由于它可以用为模板。

将具有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称为一个，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建成了一个。

受体细胞的感受态是的生理状态。

感受态细胞是可以诱导的，诱导方法有、和等。

人工感受态细胞的大肠杆菌在温度为℃时吸附DNA，在℃时摄入DNA。

为了提高重组DNA分子对E.coli的转化效率，通常可采用和。

环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链DNA转化效率的。

SalⅠ是辨认6个核苷酸的酶，其辨认切割的理论值是每个碱基就有一个切点，但在哺乳动物中大约300Kb个碱基才有一个切点。

重组DNA技术常用的限制性内切核酸酶可辨认某些特异碱基序列，具有结构。

产生平末端的方法通常有：、和。

在酶切反映管加完各种反映物后，要离心2秒，其目的是：和。

连接酶是一类用于核酸分子连接形成的核酸合成酶，有DNA连接酶和RNA连接酶之分。

为了防止载体DNA自身环化，可用脱去双链DNA的。

用于克隆的DNA片段，在质量上规定：1）稳定性，保持其分子构型；2）低蛋白质含量；3）纯度要高，不含；4）不含可透析的小分子，如酒精等。

构建基因组文库时连接方法重要是