溶菌酶的溶菌作用课件.pptVIP

第三次实验Ⅰ溶菌酶的溶菌作用Ⅱ小吞噬实验

溶菌酶的溶菌作用实验原理溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramideglycanohydrlase），是正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质。它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分(作用于β-1，4糖苷键），使细胞壁崩解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。是非特异性免疫中一种重要的体液物质。

实验材料与器材1、人的唾液（含有溶菌酶）、溶菌酶标准品、生理盐水。2、细球菌（M.Lysodeikticus)。3、1.0%盐水琼脂管（7-8mL/管）、灭菌的1mL吸管、毛细吸管、打孔器、平皿、竹签和橡皮乳头等。

13注：①唾液②生理盐水（阴性对照）③溶菌酶（阳性对照）实验步骤：1、取灭菌的小平皿一个，用灭菌1mL的吸管吸取0.5mL(9亿/mL）细球菌活菌菌液注入平皿内。2、取已溶化并冷却至45℃-55℃的生理盐水琼脂管一支，倾注于上述平皿内，迅速水平混匀，平放待凝。3、用打孔器（孔径为6mm）打孔，用竹签挑出孔中琼脂。4、先用清水漱口，略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内，用毛细吸管吸出（注意不要有气泡，不要溢出），并分别加入生理盐水和溶菌酶标准品。置37℃，18h后观察结果。

预测实验结果阳性结果：加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环。注意事项在实验中应该注意无菌操作，否则杂菌生长会影响溶菌环的观察

小吞噬实验实验原理机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类，即小吞噬细胞和大吞噬细胞。小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞。中性粒细胞（neutrophilicgranulocyte）在瑞氏染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。其颗粒表面有一层膜包裹，颗粒中含髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶、β葡糖苷酸酶、碱性磷酸酶等。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。

实验材料与器材：1、表面葡萄球菌菌液（9亿/mL）。2、3.8%枸櫞酸钠或肝素（25U/mL）。3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞氏-姬娒萨染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血针等。

实验步骤：1、取厚凹玻片一张，在凹孔中滴加一滴（0.4mL）3.8%枸櫞酸钠或肝素（25U/mL）。2、酒精棉球消毒手指后，用采血针从消毒部位采取2大滴（约0.2mL）加入凹孔中混匀。3、加表皮葡萄球菌菌液1滴（），然后用牙签轻轻搅匀。

4、将玻片放湿盒内，置37℃孵箱中40-50min。5、作用完毕，取出1滴制成薄片，自然干燥。6、置瑞氏液1min，置PH6.4PB中3min，置瑞氏-姬娒萨染料染5-10min，蒸馏水洗，待干镜检。

预测实验结果结果胞浆呈淡蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫红色。注意事项1、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。2、涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。

胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。返回

油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡兰色，核分叶、紫红深染，葡萄球菌呈兰色。可见中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白葡菌。返回