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1.检验目的与原理
1.1检验目的:检查血液中是否有疟原虫。
1.2检验原理:瑞氏染色原理:瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染
料,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的
亲和力,使其显现出不同的色调,以便于辨认。根据瑞氏染色的酸碱
物质染色性不同,可讲疟原虫各期的形态进行清楚染色,便于观察,
高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫(常见间日疟、三日疟、
恶性疟),疟原虫的各期,如环状体(早期滋养体),晚期滋养体,
裂殖体、配子体等。
2.样本收集和贮存
2.1原始样本系统:全血。
2.2标本类型:EDTA抗凝血2ml,标本的采集应使用标准一次性采
血管,充分混匀,勿震荡。
2.2保存条件:EDTA抗凝血尽快即时检测。
2.4病人要求:必须是发烧时采血。
3.试剂
3.1瑞氏染液:
3.1.1试剂成分:瑞氏染料1.0g
无水甲醇500ml
甘油10ml
3.1.2瑞氏染液配制方法:将瑞氏染料称量好后,放在乳钵中加少
量无水甲醇匀速研磨至溶解,将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中,
倒入无水甲醇继续研磨,反复多次,直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止,
染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在37℃24小时后方可使用,
放在阴凉干燥处,避光保存。
3.2磷酸盐缓冲液PH6.4
3.2.1脱水Na2HPO41份:处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干
(火燃烘烤)成粉末称量。
3.2.2无水KH2PO42.6份
将脱水Na2HPO41份和水KH2PO42.6份充分混合,边研磨边
混匀。
3.2.3将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中,混合均匀,方
可使用。
3.3器材:载玻片、加样枪、吸头、推片器
4.仪器
显微镜OLYMPUS型号:CX21。
4.1开机前检查
4.1.1OLYMPUS显微镜:检查显微镜光路系统,目镜、物镜镜头
正常,聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。
4.2日维护:每日清理纤维镜表面,保持显微镜光圈、聚光器干净
整洁;每日下班前无水乙醇(二甲苯少用,有致癌性)清洗所有显微
镜物镜(低倍镜10,高倍镜油镜)、目镜。
5.操作步骤
薄血片法
5.1取材:EDTA抗凝静脉血、耳血、手指血
5.2血涂片制备:取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片一端,用推
片以30~450均匀推成厚薄适宜,头体尾清楚、长度3~5cm的血膜
(血膜边缘距1cm左右),注意:耳血手指血第一滴血要去掉,静脉
血要充分混匀后吸取适量涂片。
5.3瑞氏染色:(1)将制好的血涂片放在染色架上,加瑞氏染液
4~5滴,静置1分钟左右,加磷酸盐缓冲液6~8滴,洗耳球混匀染
液,染色约10~15分钟,水流轻轻冲掉染液,吸水纸吸干血涂片上的
水分,晾干待检。
5.4镜检
5.4.1低倍镜观察:血涂片先在低倍镜下观察,查看染色是否满意,
选择红细胞分布分均,细胞形态清晰可辨的区域高倍镜下检查。
5.4.2油镜观察:当看到疟原虫各期阶段或某一阶段时(如环状体
).
当镜下没有找到典型各阶段的疟原虫时,油镜镜检,看100个以
上视野,仍没有找到典型疟原虫时人,报告:未找到疟原虫。
5.5报告书写,内容包括:
阳性时:报告找到疟原虫(某一期)
阴性时:报告未找到疟原虫。
6.质量控制
参加每年卫生部3次形态学室间质评工作。
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