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ELISA法在乙肝两对半测定中的质量控制分析

摘要分析酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测乙型肝炎（乙肝）两对半的

检验步骤，总结检测全程的相关影响因素。检测前标本的准备、试剂盒的影响、

检验人员的业务水平、检测过程中的标准操作规程、检测结果的解讀等是ELISA

法检测乙肝两对半的相关影响因素。ELISA法是检测乙肝两对半的灵敏方法，严

格遵循操作规程，加强质量控制，可有效排除相关影响因素的干扰，为乙肝

的临床诊疗提供有力依据。

关键词乙肝两对半；酶联免疫吸附实验；质量控制

我国的乙肝病毒目前感染率大概占到总人群的60%～

70%，这其中乙肝表面抗原携带人群占总人口的7%左右，以此计算，全

国约有9300万人携带乙肝病毒，其中慢性乙肝患者约2000万例[1-3]。乙肝两

对半作为现阶段临床诊断、治疗乙型病毒性肝炎及观察疗效的重要实验室指标，

主要使用ELISA进行检测，其灵敏度高，但在其检测过程中影响因素较多，易

导致假阳性或假阴性结果[4]。因此在实际工作中，临床实验诊断过程中需要加

强实验室的科学管理，不断强化检测的标准流程，加强实验室诊断的质量控制，

为患者提供准确的检验结果，有利于疾病的早期诊断和治疗，同时减少医患纠

纷等问题。

1检测前的质量控制

1.1标本的准备检测前应该保证标本无溶血现象，因为溶血导致红细胞破

裂后会将体内过氧化物酶活性物质释放，这种过氧化物酶活性物质会和显色剂发

生显色反應，影响显色比对；患者血块完全收缩也可能致使待检标本中的非特

异性活性物质出现部分或者完全失活的情况发生[1]，尤其是在血液标本尚没有

完全凝固的状态下，若强行对血清进行分离处理会导致纤维蛋白块形成，极易

导致检测结果的假阳性。此外患者基本信息的核对也是标本准备质量控制中至关

重要的一步。

1.2试剂盒的影响选择的试剂盒，其质量是保证实验诊断结果准确性、特

异性的必要前提。但需要临床检验人员注意的是，目前市场上不同厂家的试剂

盒在特异性、准确性、稳定性以及特异性存在一定差异，因此在实际操作过程

中，要求试剂盒保存在4℃左右的环境下，并且需在测定前将试剂盒放置于室

温进行平衡处理约0.5～1.0h[5]。此外检测结果也会因方法学不同而有所差异。

例如实际工作中常存在用ELISA法检测乙肝表面抗原（HBsAg）结果为阴性，而

电化学发光法检测结果为阳性。除方法学的灵敏度外，还存在使用单克隆或多克

隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗原或亚型乙肝标志物检测存在一定差异。

1.3检验人员的业务水平检验人员的业务水平对检测结果同样会造成重大

影响。实验室检验人员需要掌握并严格执行乙肝两对半检测过程中的室内、室间

质量控制方法，以及失控处理原则。检验人员同时还需要熟悉本实验室实验操

作流程，掌握乙肝两对半各项指标的临床意义[2]，同时需要学会正确使用加

样器和测定仪器等。

2检测过程中的质量控制

2.1加样加样枪的准确性和吸头清洁与否可以直接影响检测结果，所以检

测过程中必须严格按照操作规程执行加样。加样器需经常清洗，定期校准。放

置温育箱前，必须使用振荡器将所加样本震荡混匀30s[6]。

2.2温育标本加入板孔后，由于酶标板周围与内部孔升降温速率不同，抗

原抗体结合及酶促反应都容易产生边缘效应，导致检测孔周边与内部结果出现

差异。尤其实验室干育易出现周边效应，反应板周边孔中间孔温度出现差异，这

会使得检测结果准确性直接受升温速度影响[3]。因此为了使反应孔底部均匀升

温，实际操作过程中常使用水育的方法，并且尽量保证整版温度快速地达到平

衡，以此减少相应的误差。

2.3洗板洗板作为ELISA法操作过程中一个重要环节，其目的是将未结

合的抗原或抗体、酶标记物复合物中分离出来以保留抗原抗体复合物，同时还

能将非特异性吸附的纤维蛋白原、白蛋白、细菌中酶类物质等干扰物除去。检测

中每一次均应使用新鲜蒸馏水或去离子水来稀释洗涤剂，这样可以防止因为洗

涤液污染而出现结果误差[7]。此外洗板机针小孔极易由于血清中残留的纤维蛋

白或洗涤液析出的结晶导致阻塞，使得未结合标记酶不能彻底洗脱。所以在使

用洗板机过程中需要定时观察、检查洗板机针孔通畅与否，如出现堵塞时需及

时纠正，洗板机暂停工作时应采用蒸馏水清冼数遍。

2.4显色显色是采用ELISA