饲料中氰化物的测定方法验证报告.pdf

饲料中氰化物的测定方法验证报告

检验项目：氰化物的测定

检验依据：GB13084-2006饲料中氰化物的测定。

1适用范围

本标准适用于饲料原料和配合饲料中氰化物的测定方法。

2试样制备

按GB/T14699.1进行采样，选取饲料样品至少500g，四分法缩分至100g，再磨细，使其能

通过1mm筛，混匀，装入密闭容器中，保存备用。

定性法

3原理

氰化物遇酸产生氢氰酸，氢氰酸与苦味酸钠作用，生成红色异氰紫酸钠。

定性测定方法的最低检出量为0.15mg(取样10g时，最低检测限为15mg/kg)。

4试剂和溶液

除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中二级纯度的水。

无水乙醇，酒石酸，碳酸钠溶液（100g/L），苦味酸试纸。

5分析步骤

取200mL—300mL锥形瓶，配备一适宜的单孔软木塞或橡皮塞，孔内塞以内径0.4—0.5cm，

长5cm的玻璃管，管内悬一条苦味酸试纸，临用时，试纸条以碳酸钠溶液湿润。

迅速称取5g试样，置于100mL锥形瓶中，加20mL水及0.5g酒石酸，立即塞上悬有苦味酸

并以碳酸钠湿润的试纸条的木塞，置40℃—50℃水浴中，加热30min，观察试纸颜色变化。

如试纸不变色，表示氰化物为负反应或未超过规定，如试纸变色，需再做定量试验。

比色法

1原理

以氰甙形式存在于植物体内的氰化物经水浸泡水解后，在酸性溶液中进行水蒸气蒸馏，蒸出

的氢氰酸被碱液吸收。在pH7.0溶液中，用氯胺T将氰化物转变为氯化氢，再与异烟酸—吡

唑酮作用，生成蓝色染料，与标准系列比较定量。

比色测定方法的最终蒸馏收集液中氢氰酸检出限为0.01μg/mL。

2试剂和材料

氢氧化钠溶液（20g/L），氢氧化钠溶液（10g/L），氢氧化钠溶液（1g/L），乙酸锌溶液，

酒石酸，酚酞-乙醇指示液，乙酸溶液。

磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0):称取34.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)和35.5g磷酸氢二钠

(Na2HPO4)溶于水中,并稀降至1000mL。，

氯胺T溶液：称取1g氯胺T(C7H7SO2NClNa·3H2O),溶于水中,并稀释至100mL，临用时配制。

异烟酸-吡唑啉酮溶液:称取1.5g异烟酸(C6H5O2N),溶于24mL氢氧化钠溶液中,用水稀释至

100mL;另称取0.25g吡唑啉酮(C10H10N2O),溶于20mLN-二甲基甲酰胺{[HCON(CH3)2]}中。

合并两种溶液,混匀。

硝酸银标准溶液[c(AgNO3)=0.0192mol/L]:称取3.2617g硝酸银(AgNO3),溶于水中,并定容至

1000mL。按GB/T601规定配制并对其进行标定。

氰化钾标准溶液[ρ(CN-)=100μg/mL]

配制:称取0.25g氰化钾(KCN),溶于水中,并定容至1000mL。此溶液每毫升约含0.1mg氰化物。

其准确浓度可在使用前用硝酸银溶液标定,计算溶液中氰化物的含量。再用氢氧化钠溶液稀释

成ρ(CN-)=1.00μg/mL的标准工作溶液。

标定:吸取10.00mL氰化钾溶液于100mL锥形瓶中,加入1mL氢氧化钠溶液使pH在11以上,

加入0.1mL试银灵指示剂,用硝酸银标准溶液滴定至溶液由黄色变为橙色。消耗硝酸银溶液的

毫升数即为该10.00mL氰化钾标准溶液中氰化物(以CN-计)的毫克数。

试银灵指示剂(0.2g/L):称取0.02g试银灵(对二甲氨基亚苄基罗丹明,C12H12NO2S2)溶于

100mL丙酮中。

3仪器、设备

250mL玻璃水蒸气蒸馏装置，分光光度计。

4分析步骤

称取10—20g试样于250mL蒸馏瓶中，（精确到0.001g），加水约200mL，塞严瓶口，在室

温下放置2—4h，使其水解。加20mL乙酸锌溶液,加入1g~2g固体酒石酸。迅速进行蒸馏。

蒸馏速度控制在2mL/min~3mL/min。收集馏出液于100mL容量瓶中(管内预先放置5mL氢氧

化钠溶液作吸收液),务必使冷凝管下端插入吸收液中。收集馏出液至100mL,混合均匀。

吸取10.0mL馏出液,置于25mL具塞比色管中。另取25mL具塞比色管9支,分别加入氰化钾

标准工作溶液0mL、0.3mL、0.6mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL,各加水至10.0mL。于试样溶液

及标准溶液中各加入1mL氢氧化钠溶液和1