高效液相色谱法教学.ppt

复习①气液相相同与不同点(应用范围.流动相作用)②组份分离的影响因素(热力学.动力学)③组分分离关键---迁移速度④色谱的保留作用⑤色谱图特点⑥柱效N－与柱长无关H－优点、物理意义第159页,共167页，星期六，2024年，5月液相速率方程式,引入意义,峰扩展－平衡分配次数柱内峰扩展种类分离度影响因素分离条件摸索步骤第160页,共167页，星期六，2024年，5月仪器工作原理，各部分功能泵：往复式柱塞泵工作原理单向阀的作用脉动原因柱：组成、设计要求、柱效影响因素二极管阵列检测器作用紫外检测器（波长，样品）第161页,共167页，星期六，2024年，5月液固吸附色谱(正相):分离对象、固定相、流动相影响因素：流动相（洗脱强度）、组分填料类型（薄壳型、球型）特点硅胶特点、活性控制第162页,共167页，星期六，2024年，5月反相键合相色谱:分离对象、固定相、流动相、优缺点梯度洗脱（定义、样品）影响组分保留的因素：固定相、流动相、溶质第163页,共167页，星期六，2024年，5月离子交换色谱：原理离子交换剂：命名，pH如何影响交换容量影响保留因素：不同pKa组分，pH如何影响其保留调节离子强度:（Na2SO4、NaNO3)离子抑制法－定义pH→分子浓度→保留大小第164页,共167页，星期六，2024年，5月离子对色谱法原理（反相）影响保留的因素：极性、离子强度、PH离子对试剂的选择第165页,共167页，星期六，2024年，5月体积排阻色谱原理：校正曲线凝胶：选择要求第166页,共167页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第167页,共167页，星期六，2024年，5月*再找图*本级标题去掉边框，后面的二级标题可继续保留边框。*本级标题去掉边框，后面的二级标题可继续保留边框。一、分子量对于分子量较低（一般在200以下），挥发性比较好，加热又不易分解的样品，可以选择气相色谱法进行分析。分子量在200～2000的化合物，可用液固吸附、键合相色谱和离子交换色谱法。分子量高于2000，则可用排阻色谱法。第127页,共167页，星期六，2024年，5月二、溶解度水溶性样品最好用离子交换色谱法和离子对色谱法；微溶于水，但在酸或碱存在下能很好电离的化合物，也可用离子交换色谱法；油溶性样品或相对非极性的混合物，可用液-固色谱法。第128页,共167页，星期六，2024年，5月三、化学结构若样品中包含离子型或可离子化的化合物，可首先考虑用离子交换色谱。异构体的分离可用液固色谱法；同系物可用反相键合相色谱法；对于高分子聚合物，可用体积排阻色谱法第129页,共167页，星期六，2024年，5月小结:a.已知结构试样→查阅文献资料→以其他色谱分离技术作参考b.分子量较大（M＞2000）蛋白质、高聚物→凝胶色谱法c.分子量较小（M＜2000）试样→多种溶剂中溶解度情况决定分离类型、填料、流动相由于试样组分的复杂性，还需对试样的来源、性质等作详细了解，以作选择参考。第130页,共167页，星期六，2024年，5月分离类型选择第131页,共167页，星期六，2024年，5月应用目前已普及于几乎所有重要的分析学科领域和许多科研生产部门，高效液相色谱能较理想地分离和分析与生物医学有关的大分子和离子型物质，各种高分子化合物和不稳定化合物。例如：蛋白质、核酸、氨基酸、多糖、颜料极性类脂肪化合物、药物、染料、表面活性剂、农药、甾族化合物、多环芳烃、合成聚合物、瞟吟、维生素、除锈剂、防老剂等等。第132页,共167页，星期六，2024年，5月第133页,共167页，星期六，2024年，5月第134页,共167页，星期六，2024年，5月第135页,共167页，星期六，2024年，5月第136页,共167页，星期六，2024年，5月农药的分析第137页,共167页，星期六，2024年，5月第138页,共167页，星期六，2024年，5月第六章、实验技术和辅助实验技术§6－1定性和定量分析一、定性分析①利用保留值定性a.与标准物对照b.将标准物加入样品中c.二极管阵列检测器②液相-质谱联用③收集洗脱液后定性分析第139页,共167页，星期六，2024年，5月二、定量分析①标准曲线法（外标法）是一种简便、快速的绝对定量方法。步骤：用标准样品配制成