MDA测定方法分析和总结.docx

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丙二醛(MDA)的测定方法

一、实验原理

植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。其中丙二醛（ MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。

丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川

（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。

二、仪器设备

紫外可见分光光度计；离心机；

电子天平；研钵；

恒温水浴锅；试管；

剪刀。

三、主要试剂

1、10%三氯乙酸（TCA）

2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；

3、石英砂。

四、实验材料

正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片

五、实验步骤

??1.取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5cm长的小段，混匀。

2.称取叶片切断0.3g，放入冰浴的研钵中，加入2ml10％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，

4.然后在4℃，12,000g离心15min，取上清。

? 5.吸取离心的上清液1.5ml（对照加1.5ml10％TCA），加同体积0.5%TBA溶

液，混匀物于沸水浴上反应30min，迅速冷却后再离心。

6.取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。

2019年9月

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六、计算含量

根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：MDA浓度(μmolL-1)=6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450

MDA含量(μmol/gFW）=(MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml))/植物组织鲜

重(g)

七、注意事项

MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30min之内。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降。

如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。

可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收(最大吸收在450nm)，当植物处于干旱，高温，低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。

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2019年9月