实验三大物质鉴定.pptx

三、试验：

课题：

检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质;还原糖：可被氧化充当还原剂的糖。

常见的有：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖

注：蔗糖、淀粉（多糖）不是还原糖;可溶性还原糖与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。

CH2OH–(CHOH)4–CHO+2Cu(OH)2→CH2OH–(CHOH)4–COOH+Cu2O↓+2H2O

（葡萄糖）（浅蓝色）（葡萄糖酸）（砖红色）

即：还原糖中的醛基（–CHO）被Cu(OH)2氧化，Cu(OH)2被还原成砖红色的Cu2O沉淀;（1）材料的选用：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

（2）试剂：斐林试剂(现配现用)

甲液：0.1g/ml的NaOH溶液，

乙液：0.05g/ml的CuSO4溶液

（3）环节：

样液制备（取材5g，加入石英砂和5ml水）→取样液2ml于试管中→加入新配制的斐林试剂1ml（甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观测颜色变化（浅蓝色→棕色→砖红色）;2.蛋白质+双缩脲试剂→紫色;蛋白质的鉴定原理：;（1）选材：豆浆、鸡蛋清（必须稀释）

（2）试剂：双缩脲试剂

A液：0.1g/mL的NaOH溶液，

B液：0.01g/mL的CuSO4溶液

（3）环节：

试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL（导致碱性环境），摇匀→加双缩脲试剂B液4滴，摇匀→观测颜色变化（紫色）

注：①样液浓度不适宜过高，以免试验后黏住试管壁，洗不洁净。

②B液不能过量，多出的B液会与A液反应成蓝色，而掩盖生成的紫色。;;3.脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色

脂肪+苏丹Ⅳ→红色;（1）材料的选用：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

（2）环节

①取材：取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮

②制作徒手切片：（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央

③染色：滴2～3滴苏丹Ⅲ染液在切片上→2~3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多出的酒精（苏丹Ⅲ易溶于酒精中，防止影响试验成果）

④制作装片：滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片

⑤镜检鉴定：光学显微镜对光→低倍镜寻找着色圆形小颗粒→高倍镜观测染成橘黄色的脂肪颗???;用试管取2mL待测组织样液，向试管内滴加1～2滴碘液，观测颜色变化。;鉴定物质;例题：;4.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程为（）

A．无色一砖红色（沉淀）

B．浅蓝色一砖红色（沉淀）

C．浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）

D．浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）;6.在鉴定可溶性还原糖的试验中，加入斐林试剂时必须要（）

A．先加入斐林试剂甲液，后加入乙液

B．先加入斐林试剂乙液，后加入甲液

C．将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加

D．以上A、B、C三种操作措施都对的

7.鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的对的做法是

（）

A．先加A液，混合后再加B液摇匀观测

B．先加B液，混合后再加A液摇匀观测

C．A、B液混合后加入，摇匀后观测

D．A、B液同步加入样液，摇匀后观测