[史上最强生物课件]动物细胞工程—2-2010.8.ppt

?怎么才能得到纯的抗体??光纯还不行,还要大量.怎么办??但，有问题:?找，什么细胞能无限繁殖呢??思路就出来了:要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发.让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了.B细胞是不能无限繁殖的.怎么办?癌!只有癌细胞.但它不能产生抗体.癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补.2.技术思路的重点杂交瘤细胞HAT筛选?McAb大量培养PEG诱导细胞融合免疫B脾矿物油骨髓瘤瘤问题:在培养体系中,有4种细胞.B细胞、瘤细胞,和杂交细胞。我们还是拿不到McAb,怎么办?筛选！筛出杂交瘤细胞。怎么筛?又是一个思路问题。关键一步单克隆抗体筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备过程：特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖特点：特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫4、单抗隆抗体的应用①作为诊断试剂②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。③用于治疗疾病和运载药物利用同位素标记单抗，在特定组织成像制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。⑵用于治疗疾病和运载药物①特异性强、灵敏度高生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物②疗效高、毒副作用小结合同位素的单抗-----生物导弹结合同位素的单抗-----生物导弹单抗放射性同位素动物细胞工程小结动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术⑶图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.以下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案⑴该实验方案的目是；⑵A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生；制备单克隆抗体B细胞专一抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌专一抗体无限增殖单克隆抗体的制备1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？2、从何处获得较多的B淋巴细胞？3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？4、怎样筛选出杂交瘤细胞？5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？7、怎样获得大量的单一抗体？反复注射特定的抗原，免疫小鼠。小鼠的脾脏PEG、灭活的病毒等利用HAT选择培养基培养，筛选否用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。抗原抗体杂交法检测——呈阳性反响体内或体外大量培养特异的杂交瘤细胞，从中提取单一抗体。1.为什么要培养动物细胞？2.要培养动物细胞，对取材有何要求？实验材料，药性、毒性检测，提取细胞分泌物等选择胚胎细胞或幼年动物组织，因为其分裂增殖能力强。3.培养基是用液体的还是固体的？培养基中的成分有何特点？培养基是液体的，成份与动物内环境相似。动物血清4.动物细胞培养条件有何特点？体温和PH都应与动物体内环境相似。动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。5.培养动物细胞需要哪些条件？液体、营养物质〔血清〕、PH、温度、气体、无菌等动物组织块细胞悬液原代培养传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养参加培养液用胰蛋白酶等处理贴壁细胞适宜条件不死性细胞电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集