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化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法

α-Arbutinandother3kindsofcomponentsincosmetic

1范围

本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的含量。

本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、面膜类、粉类化妆品中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚含量的测定。

2方法提要

样品经甲醇超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，荧光检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。如有阳性结果，应用液相色谱-串联质谱法、气相色谱-串联质谱法进行定性确证。

本方法中α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检出限、定量下限及取样量为1.0g时检出浓度和最低定量浓度见表1。

表1α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度

序号

原料名称

检出限

（ng）

定量下限

（ng）

检出浓度

（μg/g）

最低定量浓度

（μg/g）

1

α-熊果苷

1.0

2.5

2.0

5.0

2

熊果苷

1.0

2.5

2.0

5.0

3

氢醌

0.10

0.30

0.20

0.60

4

苯酚

0.10

0.30

0.20

0.60

注：本方法中的熊果苷即指β-熊果苷。

3试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1甲醇，色谱纯。

3.2微孔滤膜（0.45μm）。

3.3标准品：α-熊果苷等4种原料的标准品信息详见附录A。

3.4标准储备溶液：分别称取α-熊果苷等4种原料标准品（3.3）各10mg（精确至0.00001g），置于不同10mL容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的标准储备溶液。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪，荧光检测器。

4.2天平。

4.3离心机，转速不低于14000r/min。

4.4超声波清洗器。

4.5涡旋振荡器。

5分析步骤

5.1混合标准溶液的制备

分别准确量取α-熊果苷标准储备溶液（3.4）1mL、熊果苷标准储备溶液（3.4）1mL、氢醌标准储备溶液（3.4）0.1mL和苯酚标准储备溶液（3.4）0.2mL，置同一个10mL容量瓶中，用甲醇（3.1）定容至刻度，配制成α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚浓度分别为100、100、10、20μg/mL的混合标准溶液。

5.2混合标准系列溶液的制备

准确量取不同体积的混合标准溶液（5.1），用甲醇（3.1）配制成浓度如表2所示的混合标准系列溶液。

表2标准储备溶液浓度及混合标准系列溶液浓度

序号

原料名称

标准储备溶液浓度

（μg/mL）

混合标准溶液浓度

（μg/mL）

混合标准系列溶液浓度

（μg/mL）

1

α-熊果苷

1000

100

0.25

0.5

1

2

8

20

2

熊果苷

1000

100

0.25

0.5

1

2

8

20

3

氢醌

1000

10

0.025

0.05

0.1

0.2

0.8

2

4

苯酚

1000

20

0.05

0.1

0.2

0.4

1.6

4

5.3样品处理

称取样品1.0g（精确至0.001g），置10mL具塞比色管中，加入甲醇（3.1）至刻度，涡旋振荡30s，使样品与提取溶剂充分混匀。密塞，超声提取20min，放置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000r/min）5min，取上清液经微孔滤膜（0.45μm）（3.2）过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇（3.1）稀释。

5.4参考色谱条件

色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm），或等效色谱柱；

流动相：A：水，B：甲醇（3.1）；梯度洗脱程序详见表3；

柱温：20℃；

流速：0.5mL/min；

进样量：5μL；

检测波长详见表4。

表3流动相梯度洗脱程序

时间/min

V（A）/%

V（B）/%

0.0

95

5

21.0

95

5

22.0

55

45

43.0

50

50

48.0

50

50

48.1

0

100

50.0

0

100

50.1

95

5

60.0

95

5

表4α-熊果苷、熊果苷、氢醌和苯酚的检测波长

序号

原料名称

激发波长（nm）

发射波长（nm）

1

α-熊果苷

292

337

2

熊果苷

292

337

3

氢醌

298

345

4

苯酚

280

318

5.5测定

在“5.4”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.2）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

取“5.3”项下的待测溶液进样，根据保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲