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中?华?人?民?共?和?国?国?家?标?准
2GB?5009.06—2016
2
食品安全国家标准
水产品中河豚毒素的测定
国???家???食???品???
国???家???食???品???药???品???监???督???管???理???总???局? 发??布
-?- -?-
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
2GB?5009.06—2016
2
前 言
G 22本标准代替?GB/T23217—2008《水产品中河豚毒素的测定?液相色谱-荧光检测法》、
G 2
2
2007《鲜河豚鱼中河豚毒素的测定》和?SN/T1569.—2013《出?口?河?豚?鱼?中?河?豚?毒?素?检?测?方?法 第?2?部
分:小鼠生物法》。
2本标准与?GB/T5009.06—2007相比,主要变化如下:
2
———标准名称修改为“食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定”;
———增加了净化步骤;
———修改了酶联免疫吸附法。
Ⅰ
2GB?5009.06—2016
2
食品安全国家标准
水产品中河豚毒素的测定
1?范围
本标准规定了水产品中河豚毒素的测定方法。
本标准第一法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第二法适用于河豚鱼
肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第三法适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤和鱿鱼中
河豚毒素的测定。第四法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。
第一法 小鼠生物法
2?原理
(?5% 2根据河豚毒素易溶于酸性溶液原?理,试?样?制?备?后?经?两?次?乙?酸?溶?液?0. )煮?沸?提?取,
(?5% 2
收集上清液,将两次上清液合并定容至25mL,用于小鼠生物试验。根据小鼠注射试样提取液后的死亡
时间,查出鼠单位,并按小鼠体重校正鼠单位,计算确定河豚毒素含量。
3?试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,实验用水为?GB6682规定的三级水。
13. 试剂
1
111223.. 冰乙酸(CH
11
12
2
3.. 氢氧化钠(NaOH)。
3. 试剂配制
(?5%213.. 乙酸溶液?0. ):将5?mL?冰乙酸用
(?5%21
1223.. 氢氧化钠溶液(?mol/L):将40g氢氧化钠用水溶解并定容至
122
33. 标准品
3
C C 4河豚毒素(?11H17N3O8,?AS号:368-28-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质?证?书
C C 4
准物质。
43. 实验动物
4
0 0 S小白鼠:体重19.g~21.g,无特定病原体级(PF)昆明系雄性健
0 0 S
4?仪器和设备
14. 均质器:≥12000r/min。
1
1
2GB?5009.06—2016
2
124. 电子天平:感量
12
344. 离心机?:离心力≥30000g。
3
4
4. 秒表。
5?分析步骤
注:为避免毒素的危害,应戴手套进行检?验?操?作。移?液?器?吸?头?等?用?过?的?器?材、废?弃?的?提?取?液?等?应?在?氢?氧?化?钠?溶?液
/1(?molL)中浸泡1h以上,以使毒素分
/1
15. 试样制备
1
115.. 冷冻河豚鱼样
11
将样品装于密封塑料袋内于自来水水流下快速解冻。解?冻?后?用?水?洗?净,用?滤?纸?吸?干,分?解?成?肌?肉、
肝脏、皮肤等部分。分别称量后将各组织剪碎,充分均质。
125.. 新鲜河豚鱼样
12
将样品用水洗净后用?滤?纸?吸?干,分?解?成?肌?肉、肝?脏、皮?肤?等?部?分,分?别?称?量?后?将?各?组?织?剪?碎,充?分
均质。
25. 试样提取
2
215.. 肌肉组织试
21
1 (?5%?12(?5%?12准确称取试样10g(精确至0.g)于50?mL?离?心?管?中,加?入?乙?酸?溶?液?0. )1?
1 (?5%?1
2
(?5%?1
2
水浴中煮沸10?min,不断搅拌以防止组织结块。冷却至室温,0000g?高速离心20min,移取上清液于
25mL?容量瓶中。向沉淀中加入乙酸溶液?0. )1mL,充分混匀,沸水浴中煮沸5min,不断搅拌以防
止组织结?块。?冷?却?至?室?温,0000g?高?速?离?心?20?min,移?取?上?清?液。?合?并?上?清?液,混?匀,用?乙?酸?溶?液
(?5% 40. )定容至25?mL。此提取液1?mL?相当于0.
(?5% 4
225.. 肝脏组织试
22
1 (?5%?8((?5% 4准确称取10g(精确至0.g)试样于50?mL?离心管中,加入乙酸溶液?0.
1 (?5%?8
(
(?5% 4
下20000g?高速离心20?min,移?取?上?清?液?于?25?mL?容?量?瓶?中。?用?8?mL?乙?酸?溶
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