细胞融合与单克隆抗体.ppt

名字：Dolly(1996.7.5-2003.2.14)性别：雌出生地点：英国爱丁堡市罗斯林研究所创造者：伊恩·维尔穆特及其领导的小组基因父亲：无

基因母亲：一只芬兰多塞特白面绵羊

生育母亲：一只苏格兰黑脸羊12345ABC核移植技术、细胞融合胚胎移植技术D三、转基因动物转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。（一）转基因动物的概念转基因动物（transgenicanimal）是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。外源基因随细胞分裂分配到所有子细胞中并遗传给后代，这种动物叫转基因动物。转基因无毛鼠转基因无毛鸡（二）转基因动物技术的主要步骤获取外源目的基因外源目的基因导入生殖细胞或胚胎干细胞选择携带目的基因的细胞，选择体外培养系统和宿主动物转基因胚胎的发育及鉴定筛选所得的转基因动物（三）转基因动物的技术路线

经典的技术路线?目的基因

显微注射

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已交配的取出移植受体动物妊娠

供体动物受精卵输卵管转基因动物

缺点：注入目的基因的命中率低，目的基因的整合率低，受精卵移植的受孕率低。?整合胚胎移植的技术路线（三）转基因动物的技术路线

卵子精子目的基因受精卵体外受精体外培养多细胞胚胎或囊胚检测整合外源基因的胚胎受体动物子宫转基因动物胚胎移植优点：受精卵的成活率高达90％以上，外源基因整合率高，提高受孕率。整合卵受精的技术路线：

?

目的基因转基因动物

导入

逆转录病毒妊娠

精子

感染

体外受精胚胎移植

卵母细胞成熟卵细胞囊胚受体动物子宫

?

特点：卵母细胞导入目的基因后再与精子受精。（三）转基因动物的技术路线

（四）转基因动物的制作方法1、受精卵显微注射法2、胚胎干细胞（ES细胞）法3、逆转录病毒感染法4、体细胞核移植法5、精子载体法1、受精卵显微注射法以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。目前应用较广泛，最早最经典的方法。（1）准备假孕母鼠（养母）（2）受精卵的准备（3）基因导入（4）胚胎移植（5）对幼鼠的鉴定受精卵显微注射法实验程序：优点：外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过程直观；整合率高缺点：设备昂贵、环节较多对操作人员有较高的技术要求低效率（尤其是大家畜）对卵子伤害大，胚胎存活率低基因整合随机性ES细胞是早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜能细胞系。将携带有外源基因的ES细胞注入到动物的早期胚胎内，可产生嵌合体及转基因动物。它本身是二倍体，能在体外培养，具有高度的全能性，可以形成包括生殖细胞在内的所有组织，并且在不同的培养条件下表现出不同的功能状态。在ES细胞上的基因操作：可以通过逆转录病毒感染、脂质体介导、电穿孔、磷酸钙共沉淀等方法将外源基因导入ES细胞。因此，借用ES细胞系可将人们企望的某种不完整的、无功能基因直接引入到ES细胞中，通过细胞增殖、筛选可得到丧失了某种基因功能的动物后代。2、胚胎干细胞（ES细胞）法优点：外源基因整合情