EP6线性评价【优质文档】.ppt

体外诊断试剂分析性能评估

---线性范围WYSEP6-A:EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures:AStatisticalApproach;ApprovedGuideline本指南的目的旨在提供一种定量测量程序线性评价的统计学方法。确定一种方法的非线性浓度范围，及在每个浓度水平上非线性的程度。体外诊断试剂产品性能评估过程0102030405060701020304050607确定线性范围数据修正基本原则样本要求数据收集数据检查数据分析（1）实验操作人员应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理，确保仪器工作状态正常，采用适当的校准品对仪器进行校准。（2）仪器的各项性能指标（如精密度）合格，不存在明显的携带污染等。（3）应使用同批号试剂及校准品。线性范围评估的基本原则确定样本类型：为避免基质效应对结果的影响，进行线性评价时所选用的样本应与临床实验样本相似，但不可采用含有对测定方法具有明确干扰作用的样本，如溶血、脂血、黄疸或含有某些特定药物的样本。理想样本为分析物浓度接近预期测定上限的病人混合血清，可用其他病人样本将其稀释为预定浓度。EP6-A中建议应尽可能按以下顺序进行样本种类的选择：①病人混合血清；②用适当稀释液稀释的病人血清；③添加分析物的病人样本；④用处理过的低浓度物质或处理过的血清物质稀释的病人血清；⑤商业质控品/校准品/线性物质；⑥使用生理盐水稀释的样本；⑦稀释不足或过度稀释的商业质控品；⑧水溶液；⑨其他溶剂的溶液。实验样本的基本要求和制备方法：建立线性范围：建议9至11个浓度，每个浓度下重复2至4次；验证内部方法或修正方法：建议7至9个点，每个浓度重复2至3次；验证线性范围在实验室有效：建议5至7个浓度，每个浓度重复2次；注意：当建立方法的线性范围时，应有20%到30%的样本的浓度范围超出预期的测量范围，但在可接受的线性响应范围内。样本数量的要求：不同浓度水平样本制备表：实验过程：所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。数据分析方法：确定自己所要求的测量误差、偏倚、随机误差（不精密度）、非特异性（干扰）的大小。初步数据检查：检查数据是否有极端明显的差异（或错误）？无？有？目视每组数据点内有无离群点？无？有？一个？一个以上？如果需要，将每一组的检测数据按检测时间次序排列，检查是否有漂移或趋势性变化。观察每个浓度水平的响应值之间的差异。目视检查XY散点图对于后续的线性评估是非常重要的，它可以很容易的发现非线性，或测量范围是否太窄或太宽，也可以为后续的统计分析选择更合适的统计分析方法。设定偏差标准：确定线性范围：多项式线性评价：对实验数据进行一次、二次、三次多项式回归分析。具体的评价方法包括两部分：第一部分：检验非线性多项式是否较线性多项式与数据更为相符。第二部分：当非线性多项式拟合数据点比线性好时，判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小于预先设定的该方法的允许偏差。样品重复检测的随机误差评估：R：为重复测定的次数（j=1,2,3…R）L：样本数ri：样本i处的平均值。L：样本数ri：样本i处的平均值。多项式回归方程：阶别回归方程回归自由度（Rdf）一次Y=b0+b1X2二次Y=b0+b1X+b2X23三次Y=b0+b1X+b2X2+b3X34一次多项式模型中的b0和b1两个系数不用分析二次多项式模型中，b2为非线性系数；三次多项式模型中，b2和b3为非线性系数；计算每个非线性系数斜率的标准误SEi（可由回归程序算出），然后进行t检验，判断非线性系数是否有统计学意义，即与0之间有无差异。评价线性时至少要求五个不同浓度水平样本，每个水平重复测定两次。非线性系数b2，b3的t检验：t=bi/SEi自由度计算公式：df=L·R-Rdf，L：不同浓度样本数，R：重复检测次数，Rdf：回归自由度例：三次多项式回归时，L=5，R=2，Rdf=4，df=5*2-4=6。查t值表（附录B)（双侧α=0.05）。如非线性系数b2、b3与0比较，经t检验（p0.05），存在线性关系，不精密度满足条件时，则分析完成。如二次多项式模型的非线性系数b2，或三次多项式模型的b2或b3中任一