第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术.docxVIP

专注：心无旁骛，万事可破

专注：心无旁骛，万事可破

PAGE/NUMPAGES

专注：心无旁骛，万事可破

第2节微生物的培养技术及应用

第1课时微生物的基本培养技术

一、培养基的配制

1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

2．种类eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(液体培养基,↓加入凝固剂?如琼脂?,固体培养基))

特别提醒(1)固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。

(2)病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用人工培养基来培养。

3．作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。

4．成分

(1)主要成分：水、碳源、氮源、无机盐。

(2)其他成分：还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。

(3)牛肉膏和蛋白胨：来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。

(4)几种微生物培养时的特殊需求：培养乳酸杆菌时，需要添加维生素；培养霉菌时，需要将培养基调至酸性；培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性；培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。

(1)所有的培养基中都要加入琼脂()

(2)培养不同微生物的培养基成分完全一样()

(3)培养霉菌时需将培养基调至碱性()

答案(1)×(2)×(3)×

试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。

项目

自养型微生物

异养型微生物

碳源

CO2、NaHCO3等无机物

糖类等有机物

氮源

NH3、硝酸盐等无机物

尿素、蛋白质等有机物

误区警示(1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用的无机氮源是铵盐和硝酸盐。

(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源和能源。

(3)某些微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成作为生长因子的物质所需要的酶或合成能力有限。

二、无菌技术

1．消毒

(1)概念：指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。

(2)适用对象：操作的空间、操作者的衣着和手等。

(3)常用方法：煮沸消毒、巴氏消毒等。

2．灭菌

(1)概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

(2)适用对象：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等。

(3)常用方法：湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。

(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染()

(2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底()

(3)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用干热灭菌法进行灭菌()

答案(1)√(2)√(3)×

消毒和灭菌的原理都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。

无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力，例如，活体生物材料、操作者的双手等只能消毒，而不能灭菌。

关键点拨无菌操作中的5个注意事项

(1)用体积分数为70%的酒精消毒效果最好，原因是浓度过高，菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。

(2)接种室、接种箱和超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物。在

照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。

(3)芽孢是某些细菌生长到一定阶段，在细胞内形成的休眠体。孢子是某些微生物的繁殖体。

(4)一般情况下，在实验操作过程中，对能灭菌的对象进行灭菌处理，如培养皿及用到的各种器具；对无法灭菌的对象则进行消毒处理，如实验操作者的衣着和双手等。

(5)与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法的优点是在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。

(6)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免污染环境以及操作者自身被微生物感染。

三、微生物的纯培养

1．概念：将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。

2．微生物的纯培养步骤(以酵母菌的纯培养为例)

(1)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。

(2)菌落的概念：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。

(3)接种方法：最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。

(4)平板划线法

①原理：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分