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微生物鉴定中的生理生化反应

摘要

各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，反映出它们具有不同的酶系

和不同的生理特征，本实验通过细菌对大分子物质如淀粉、油脂的水解，糖

发酵试验，甲基红实验等几个实验，分别来达到不同目的：证明不同微生物

对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶

系统，掌握进行微生物大分子物质水解实验的原理和方法；了解糖发酵的原

理和重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法；了解甲基红实验的

原理、意义和方法。

关键词

淀粉水解实验油脂水解实验糖发酵试验甲基红实验

前言子的糊精、双糖和单糖，脂肪水解

微生物对大分子物质如淀粉和酶水解脂肪为甘油和脂肪酸等，这

脂肪不能直接利用，必须依靠产生些过程均可以通过观察细菌菌落周

的胞外酶将大分子物质水解后，才围的物质变化来证实。如淀粉遇碘

能被微生物吸收利用。胞外酶主要液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的

为水解酶，通过加水裂解大分子物区域，用碘液测定时，不会产生蓝

质为较小化合物，使其能被运输至色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水

细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分解后产生脂肪酸可以改变培养基的

pH，使pH降低，加入培养基的中性乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，

红指示剂会使培养基从淡红色转变培养基就会变酸，使加入培养基的

为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。甲基红指示剂由橙黄色（pH6.3）变

糖发酵试验是常用的鉴别微生为红色（pH4.2），即甲基红反应。

物的生化反应，绝大多数细菌都能尽管所有的肠道微生物都能发酵葡

利用糖类作为碳源，但是它们在分萄糖产生酸，但这个试验在区分大

解糖类物质的能力上有很大的差肠杆菌和产气肠杆菌上仍然是很有

异，有些细菌能分解某种糖产生有价值的。这两个细菌在培养的早期

机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和均产生有机酸，但大肠杆菌在培炎

气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），后期仍能维持酸性pH4，而产气肠

有些细菌只产酸不产气。例如，大杆菌则转化有机酸为非酸性末端产

肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至

产气；普通变形菌分解葡萄糖产酸大约6。因此大肠杆菌为阳性，产

产气，不能分解乳糖。发酵培养基气肠杆菌为阴性。

含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、1.材料与方法

倒置的德汉式小管和不同的糖类。1.1材料

当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可1.1.1菌种

由紫色（pH6.8）转变为黄色枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）大

（pH5.2）。气体产生可由倒置的德肠杆菌(Escherichiacoli)金黄色

汉式小管中有无气泡来证明。葡萄球菌(Staphylococcusa