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(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库(cDNA文库)第28页,课件共61页,创作于2023年2月②基因文库的构建方法(1)从基因文库中获取目的基因a.直接分离—“鸟枪法”(原核细胞)优点:操作简便缺点:工作量大,具一定盲目性b.人工合成—反转录(真核细胞)取出DNA用限制酶切断DNA第29页,课件共61页,创作于2023年2月通过对受体菌的培养而储存基因③基因文库的储存(1)从基因文库中获取目的基因第30页,课件共61页,创作于2023年2月(2)利用PCR技术扩增目的基因①PCR全称为多聚酶链式反应,在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。第31页,课件共61页,创作于2023年2月③条件:___________、___________、__________________、________________。②原理:__________DNA复制脱氧核苷酸DNA引物热稳定DNA聚合酶模板DNA(2)利用PCR技术扩增目的基因①PCR全称为多聚酶链式反应,在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。④过程:第32页,课件共61页,创作于2023年2月模板DNA95℃第33页,课件共61页,创作于2023年2月PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物第34页,课件共61页,创作于2023年2月PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶第35页,课件共61页,创作于2023年2月PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第1轮结束第2轮开始第36页,课件共61页,创作于2023年2月④过程:a.DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板在热作用下,_____断裂,形成___________b.退火(复性55℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部________。c.延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链第37页,课件共61页,创作于2023年2月蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成(3)化学方法人工合成目的基因DNA合成仪第38页,课件共61页,创作于2023年2月从基因文库中获取利用PCR技术扩增利用化学方法人工合成(一)目的基因的获取三、基因工程的基本操作程序第39页,课件共61页,创作于2023年2月用一定的_________切割质粒,使其出现一个切口,露出____________。用_____________切断目的基因,使其产生_________________。将切下的目的基因片段插入质粒的切口处,再加入适量___________,形成了一个重组DNA分子(重组质粒)限制酶黏性末端同一种限制酶相同的黏性末端DNA连接酶(二)基因表达载体的构建(核心步骤)三、基因工程的基本步骤第40页,课件共61页,创作于2023年2月重组载体组成:三、基因工程的基本步骤a.目的基因b.启动子c.终止子d.标记基因(二)基因表达载体的构建(核心步骤)第41页,课件共61页,创作于2023年2月将目的基因导入受体细胞将受体细胞进行扩增(三)将目的基因导入受体细胞三、基因工程的基本步骤1.植物细胞:2.动物细胞:3.微生物细胞:(受精卵、卵细胞、体细胞)(受精卵或早期胚胎干细胞)农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞法第42页,课件共61页,创作于2023年2月1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法(双子叶植物和裸子植物)Ti质粒目的基因构建表达载体导入植物细胞插入植物细胞染色DNA表达新性状转入农杆菌第43页,课件共61页,创作于2023年2月2.将目的基因导入动物细胞方法:显微注射法(将基因表达载体提纯,用显微仪注射到受精卵中)思考:为什么要用受精卵而不用体细胞?第44页,课件共61页,创作于2023年2月微生物作受体细胞原因:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
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