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房瑞
基因工程基本操作程序：
一、获取目的基因
二、构建表达载体
三、导入受体细胞
四、目的基因检测与鉴定
生物材料
人工合成
基因组文库
mRNA
DNA
cDNA文库
PCR
一定大小的DNA
构建表达载体
目的基因获取
导入受体细胞
第一步
目的基因检测与鉴定
得到转基因生物
第二步
第三步
第四步
cDNA
DNA文库构建
DNA
mRNA
转录
cDNA
cDNA
逆转录
cDNA文库构建
PCR
第一轮
第一轮
PCR
第二轮
PCR
第二轮
第二轮
人工合成
蛋白质功能
氨基酸顺序
mRNA碱基顺序
DNA碱基对顺序
化学合成DNA
即目的基因合成
第二步、表达载体构建
质粒结构
酶切
连接
第三步、导入受体细胞
一、导入植物细胞
1、农杆菌转化法
2、基因枪转化法
3、花粉管通道法
二、目的基因导入动物细胞：
显微注射法
三、目的基因导入微生物细胞：
首先用Ca2+处理细胞，让其变为容易吸收DNA的感受态细胞。
再让感受态细胞与重组DNA的缓冲溶液混合完成转化。
第四步、目的基因检测与鉴定
检测方法
一、分子水平检测：
1、检测DNA是否插入目的基因
2、检测目的基因是否转录了mRNA
3、检测是否翻译了蛋白质
二、个体水平检测：
检测目的基因是否赋予该生物相应性状。
谢谢!
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