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抗肿瘤转移机制的实验方法学研究进展

肿瘤转移是是恶性肿瘤的一个重要表现,是指肿瘤细胞从原发部位侵入血

管、淋巴管或体腔，在新的部位由于血管生成而继续生长，从而形成与原发瘤相

同类型肿瘤的过程。主要经淋巴管、血道转移,它的出现往往标志着预后不良,大

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多数的癌症患者死亡与肿瘤转移密切相关。肿瘤转移是一个多阶段的复杂过程,

大体归纳如下:即机体内原发部位的肿瘤细胞在生长过程中细胞内部的骨架发生

重排、变形,从而脱落侵入细胞外基质（ＥCM），酶解ＥＣM进入循环系统，在

循环系统释放的血管生成因子与内皮细胞特异性受体结合后，生成新的血管,瘤

细胞在血管构建的“骨架”上增殖，形成一个新的癌巢,再脱离出循环系统,在机

体某个点定居下来，并逐渐增殖成长为一个新的肿瘤瘤块的一系列过程。如果肿

瘤细胞反复转移，后果则相当的严重。这是目前肿瘤难治的一个主要原因，所以

研究抗肿瘤药物抗肿瘤转移的机制，从而筛选、开发出新的能促进机体抗肿瘤转

移的药物是非常重要的。

抗肿瘤转移机制的药理实验方法主要涉及到以下几个方面：

1.建立肿瘤转移的动物模型

一般以大鼠、裸鼠为常用动物模型。将目标瘤细胞如SGC-790１胃癌细胞株、

S180肝癌细胞株等置于含10%小牛血清的RPMI-1640培养基中,培养箱条件为3

７℃,5%CO进行细胞培养,0．1%胰酶消化传代后制备细胞悬液，之后将细胞悬

２

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液以皮下注射或腹腔注射的方式，将肿瘤移植入动物体内。黄挺等人采用皮下

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接种W256癌肉瘤的方法建立了Wiｓtａｒ大鼠的肝癌转移模型;魏锦来通过腋

下接种SGC-7901细胞悬液的方式建立了裸鼠的胃癌原位移植瘤动物模型。此外

还有尾静脉注射、裸鼠脑部右尾状核注射人肿瘤组织制备的细胞悬液等方式接

种。现阶段裸鼠的应用对于肿瘤方面的研究更有意义,因为裸鼠体表无毛，其先

天性缺乏T淋巴细胞，免疫功能低于别的实验动物,更容易进行异种肿瘤的移植。

而大鼠由于价格相对便宜而应用较为广泛。此外也可用Ｃ5７BL/６小鼠等动物建

立动物模型。均应在无菌条件下进行造模，以免细菌等微生物产生污染。

2.观察转移情况

肿瘤转移的动物模型建立以后，需对动物进行分组实验研究。一般分为空白

对照组、药物组、阳性药对照组等。薛晓红等人在进行乳宁冲剂及其拆方对裸鼠

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移植瘤肺转移的抑制作用及机制时，将裸鼠分为6组,每组８只,7周后处死裸鼠,

取出原发部位肿瘤和肺,分别称重、检测原发部位肿瘤体积和肺部肿瘤转移情况。

观察转移情况的方法是:将组织块固定于含有甲醛的固定液中２4小时，电子显微

镜观察组织表面灰白色结节的数目,即可求出各组平均转移数和转移抑制率。肿

瘤转移的好发部位通常是淋巴结、肺部、肝脏甚至脑部，通常需要重点观察这些

部位，另外由于肿瘤转移会通过血管,因此还需检查血液的转移情况。一般要在

动物建立肿瘤模型的7-10周后才可处死动物观察转移情况,时间过短可能还不能

发生转移,时间过长则可能导致动物的死亡。

3．MＭＰ、VEＧF的检测

MMP是一种参与肿瘤转移的内源性蛋白酶，其全名是基质金属蛋白酶

(matrixmetａｌlｏproteinaｓes,MMP),主要分为MＭＰ-2、MＭP-9等成分。人

体的成纤维细胞、巨噬细胞甚至一部分肿瘤细胞都会分泌出这种酶,其在纤溶酶

等外源性酶的作用下，被激活从而酶解细胞外基质（EＣＭ）,使肿瘤细胞越过由

ECM构成的天然