实验大肠杆菌的培养和分离.ppt

(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。该方法首先配制LB培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60℃，在旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中数目；该数据比实际数值要(填“高”或“低”)，原因是?。实验完成后需要对培养基进行处理，然后才能倒掉。第55页，课件共78页，创作于2023年2月(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LB培养基，灭菌后，将在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养h即可。第56页，课件共78页，创作于2023年2月【解析】(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。第57页，课件共78页，创作于2023年2月①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。③包扎：用________或报纸三角漏斗棉花塞封口膜6层纱布牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法④灭菌1）加水：2）装锅：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_________.物品放置的要求______________________：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_______内。再以________方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。不触及内胆整齐、稳定、留出空隙排气槽两两对称第23页，课件共78页，创作于2023年2月3）加热排气：4）保温保压：5）出锅：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的_______。_________________后，关上排气阀。当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制热源，维持压力至______min。切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。冷空气待冷空气完全排尽0115排气阀否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80℃_____中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____。烘箱污染第24页，课件共78页，创作于2023年2月倒平板：待培养基冷却至_____℃时，将每只培养皿倒入_________ml未凝固的固体培养基，置于_____位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_______备用。制斜面：将未凝固的固体培养基的试管____放，冷却待凝使即成为斜面。６０10～12水平倒置斜⑤倒平板、制斜面操作平台：灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_________和___________，灭菌30min.过滤风紫外线超净台第25页，课件共78页，创作于2023年2月思考题：A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。3、整个操作在酒精灯火焰旁进行4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。B、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度呢？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。第26页，课件共78页，创作于2023年2月思考题C、为何要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落培养基，造成污染。D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用