实验二银耳多糖含量的测定.ppt

关于实验二银耳多糖含量的测定第1页，课件共26页，创作于2023年2月一、实验目的学习和掌握多糖含量测定的原理和方法。第2页，课件共26页，创作于2023年2月三、实验原理多糖在浓硫酸中水解，进一步脱水生成糖醛及其衍生物，与蒽酮（10-酮-9,19-二氢酮）反应生成蓝绿色复合物，在620nm处有最大吸收值。以标准葡萄糖溶液作标准，在620nm波长处进行比色，可计算出总糖的含量。第3页，课件共26页，创作于2023年2月（1）糖经浓无机酸处理后，脱水生成糠醛或糠醛衍生物；第4页，课件共26页，创作于2023年2月（2）糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸的作用下，能与蒽酮化合物反应生成有色物质。（3）反应液颜色的深浅，反映出糖浓度的高低。第5页，课件共26页，创作于2023年2月四、仪器、试剂与药品试剂：0.1mg/ml的葡萄糖标准品、蒽酮试剂、蒸馏水样品液：0.5mg/ml试管、电炉、可见光分光度计、容量瓶etc.第6页，课件共26页，创作于2023年2月五、实验操作1、标准曲线的制作(1)加样：(2)将加好的样品混匀，沸水浴10min，室温冷却，于620nm处比色。(3)以第一管为空白，进行比色。以光密度（OD值)为纵坐标，糖的含量(μg)数为横坐标，得标准曲线。第7页，课件共26页，创作于2023年2月2.样品的准备称取适量样品，先加少量的水溶解，最后定容于50ml，至溶液浓度约为0.5mg/ml.3.样品中多糖含量的测定分别吸取0.1、0.3和0.5ml样品液，用蒸馏水补足1.00ml。加入蒽酮试剂，同标准曲线制作之操作，比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。第8页，课件共26页，创作于2023年2月第9页，课件共26页，创作于2023年2月六、思考题1、根据样品液多糖含量，计算实验一中多糖的提取率。2、根据蒽酮测糖原理，设计测定化合物中淀粉量的方案。第10页，课件共26页，创作于2023年2月注意事项：加样要求准确。第11页，课件共26页，创作于2023年2月实验三猪胃粘膜中提取胃膜素、胃酶第12页，课件共26页，创作于2023年2月一、实验目的学习从猪胃粘膜中提取胃膜素、胃酶的原理和方法，了解有机溶剂分级沉淀法的应用。第13页，课件共26页，创作于2023年2月二、简介胃膜素：功效：一种以黏蛋白为主要成分的生物活性药物，有极强的黏附作用，可直接作用于消化道内壁，在胃及十二指肠溃疡面形成一层保护膜，减少胃酸对它的刺激，利于溃疡面的愈合；另一方面有润滑作用，使进入消化道的食物易于在消化道内移行，有利于减少某些物质对溃疡面的刺激。胃膜素临床上用于胃及十二指肠溃疡。性质描述:淡黄色或淡灰色粉末，或微小颗粒。着水胀为粘浆。显微溶状态，略带类蛋白胨臭。具有很强的粘附力。第14页，课件共26页，创作于2023年2月胃蛋白酶：存在于动物胃液中，以无活性的胃蛋白酶原形式，存在于胃底的主细胞中，在酸性条件下，胃蛋白酶原变化成有消化蛋白质能力的胃蛋白酶。在医学上主要用于治疗消化不良、食欲不振、慢性胃炎等，工业上可作水解蛋白用。干燥的胃蛋白酶为白色或淡黄色粉末，引湿性强，易溶于水；对热较稳定，100℃10min不破坏。水溶液中，70℃以上破坏。第15页，课件共26页，创作于2023年2月三、实验原理胃粘膜一般指胃底粘膜，分泌胃液的主细胞集中在胃底粘膜，呈暗红色，直径约10-12厘米圆块，约100g。胃膜素是从猪胃粘膜经胃蛋白酶和盐酸消化后的上层液中，60%左右的乙醇所沉淀的部分。蛋白质、酶等极性物质的水溶液加入与水混溶的有机溶剂，可沉淀析出。第16页，课件共26页，创作于2023年2月四、仪器、试剂与药品水浴锅，搅拌器，冰箱，真空干燥，盐酸，氯仿，丙酮，乙醇，离心机等。第17页，课件共26页，创作于2023年2月四、实验操作1.激活提取猪胃粘膜0.55Kg（5只猪肚）+水约220ml升（胃粘膜的40%），用1：1盐酸调pH2.5-3.0，45-50℃搅拌提取3h(在搅拌的过程中需注意不停的调节pH)。2.脱脂分层双层纱布过滤，冷却至室温，缓慢加入约55ml氯仿（胃粘膜的10%），搅拌2h，室温静置24h后，放掉底层的氯仿和杂质，上清液预冷至5℃以下第18页，课件共26页，创作于2023年2月3.胃膜素分离上清液在搅拌下（同一方向，否则胃膜素会散开）缓缓加入预冷至5℃以下的丙酮（γ=0.708）至比重约0.97，捞出胃膜素，以适量的75%乙醇洗两次，真空干燥。4.胃酶的沉淀母液再加丙酮至比重约0.91，有黄色沉淀产生，