7300操作手册(最新整理版).docxVIP

操作手册

快速入门指南目录

一.开机3

二.实时定量的软件运行3

新建文献3

探针设立4

填样品表4

参比荧光5

循环参数5

启动扩增5

三.实时定量的数据分析6

数据分析6

基线设定6

线性图谱6

原始数据7

原则曲线7

实验报告7

四.终点读板的软件运行7

新建文献8

探针(DETECTOR)设立8

位点(MARKER)设立8

填样品表8

参比荧光8

终点读板9

五.终点读板的数据分析9

数据分析9

信号分布9

基因分型9

保存成果9

六.日常维护10

荧光污染的检查与解决10

检测器光源的更换流程10

7000型荧光定量PCR仪?ABIPrism

快速入门指南一.开机

确认电脑与主机的数据通讯线(灰色USB连线)连接对的。

确认电脑处在外接电源供电状态。

启动电脑，以Administrator顾客名登录，进入Windows操作系统。

待桌面图标出现后，打开7000主机的电源。

待主机的电源批示灯点亮后，启动7000SDS应用软件。

在进行实验之前，请先检查样品加热模块以拟定它没有受到荧光污染，具体办法请按照第6节的“荧光污染的检查与解决”流程进行。

二.实时定量的软件运行

基因体现的绝对定量和相对定量研究、转基因食品的检测(GMO)、多个病原体的检查检疫等多个定量应用；以CT值的大小作为样品阴性、阳性鉴定根据的定性应用；以及SNP检测、等位基因鉴定实验等的第一步PCR扩增，都是采用实时定量模式，按照下列环节操作。

新建文献菜单File→New，Assay选择AbsoluteQuantification(实时定量模式)，打开一种空白的96孔板文献。

探针设立双击任意一种孔，打开WellInspector窗口。该窗口也能够从菜单View→

WellInspector打开。

初次使用软件，或者探针（Detector）没有设立好，请点击AddDetector按钮，打开DetectorManager窗口。该窗口也能够从菜单Tools→DetectorManager打开。如果Detector列表中没有适宜的探针，点击按钮File→New，新建探针：设定探针的名称(建议使用所研究基因符号，如GAPDH、ACTIN等)、报告基团(FAM或者VIC)、淬灭基团(TaqMan探针选TAMRA；MGB探针选None)、颜色(任意指定)等。设立完毕后点击OK，该探针即出现在探针列表中。重复此过程，设立其它的探针。

在DetectorManager窗口，从探针列表中点击选择所需探针，按住Ctrl键能够选择多个探针，再点击AddtoPlateDocument按钮。最后点击Done关闭DetectorManager窗口。此时WellInspector窗口仍然是打开的。

填样品表在96孔表中选定有样品的一种或多个孔，在WellInspector页面的SampleName栏中填入样品名称；在探针列表的Use项下的方框中，打钩选择要用的一种或多个探针；在Task栏中选择指定样品类领：阴性对照选NTC；未知样品选Unknown；原则品选Standard。对于Standard，还要在Quantity栏中输入DNA拷贝数。注意：只有在这里输入拷贝数后，软件才干自动生成原则曲线。建议原则品的浓度在5点以上。建议每个样品(涉及原则品)都按照统计学规定作一定数量的复管。

参比荧光如果使用的是ABI公司的定量PCR试剂，如TaqManUniversalPCRMasterMix或者SYBRGreenPCRMasterMix等，参比荧光(PassiveReference)选ROX；

如果使用的试剂中不含有参比荧光，请选None。完毕后点击右上角的X按钮，关闭WellInspector窗口。

C2?7.循环参数切换到Instrument页面，设定及修改PCR热循环程序：在ABI公司默认的程序中，50C10?min是UNG酶起作用的环节，UNG酶能够防止其它PCR扩增的产物(其中以U替代T)对定量PCR的污染；95C1?C15sec和60?min的作用是激活金牌Taq酶，同时灭活UNG酶；40个循环的95C1?min是定量PCR的循环环节。7000默认在最后一步，也就是60C?min复性和延伸时收集荧光信号。如果使用ABI公司的定量PCR试剂，上述参数不需要调节，直接运行PCR循环