B细胞中PTIP基因在DSS诱导的急性溃疡性结肠炎中的作用研究.pdf

摘要

背景：免疫失调是已被证实的溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）的重要

致病因素。由于UC和克罗恩病（CrohnsDisease,CD），这两种主要的炎症性

肠病（inflammatoryboweldisease,IBD）的发现与辅助T细胞1（Thelper,Th）

和Th2相关。因此，在过去的三十年里，对UC的研究主要集中在T细胞上，

而对B细胞在该病中的作用了解较少。近几年来，研究者们发现IgG抗体会加

快UC的疾病进程，而IgA抗体和B-1细胞对UC的发病有保护作用。这证明B

细胞在UC中扮演着重要作用。PTIP（paxtransactivationdomain-interacting

protein）是一种广泛存在的核蛋白，对B细胞亚群的发育和体液免疫至关重

要。PTIP基因缺失会直接导致B-1细胞亚群及天然抗体缺陷。但PTIP在B细

胞相关的炎症性疾病中的作用研究还是空白。

目的：本项研究通过葡聚糖硫酸钠（dextransulfatesodium,DSS）诱导的溃

疡性结肠炎模型，研究PTIP对UC发病作用及其机制。

方法：选择8周龄野生型（wild-type,WT）小鼠和B细胞特异性敲除PTIP

（PTIP-/-）小鼠进行为期7天的DSS急性UC造模，期间记录小鼠疾病活动指

数（diseaseactivityindex,DAI）。造模结束后对小鼠结肠进行苏木精伊红染色

（HE），并通过流式细胞术检测小鼠脾脏和结肠中的免疫细胞占比及细胞因

子TNF-α、IL-6和IFN-γ的分泌情况。同时通过ELISA检测两组小鼠造模前后

血清IgG和IgM水平。为了探究天然抗体对UC的作用，在进行DSS诱导前17

天将WT小鼠的血清回输给PTIP-/-小鼠（每隔3天注射一次，120-150μL/次），

并在诱导期间保持注射，以重塑PTIP-/-小鼠血清抗体水平。抗体重塑完成后进

行为期7天的DSS急性UC造模，期间记录小鼠DAI。造模结束后对小鼠结肠

进行苏木精伊红染色（HE）。为了探究B细胞PTIP缺失对UC的保护性作用

是否源于PTIP对B-2细胞的调控，我们将WT和PTIP-/-小鼠的脾脏B-2细胞移

植给受体NCG小鼠。移植完成后对受体NCG小鼠进行为期7天的DSS急性

UC造模，期间记录小鼠DAI。造模结束后对小鼠结肠进行苏木精伊红染色

（HE），并再次通过流式细胞术检测小鼠器官中免疫细胞占比。同时通过

ELISA检测了受体NCG小鼠急性UC造模结束时的血清IgG和IgM水平。

结果：DSS造模结束后，PTIP-/-组小鼠的DAI仅为WT组小鼠的一半，显

现出B细胞PTIP基因缺陷对UC的发生具有极强的保护性作用。同时小鼠结肠

病理切片显示，WT组小鼠结肠结构完全消失而PTIP-/-组仅出现隐窝异常和杯

状细胞部分缺失。流式结果显示，WT小鼠脾T细胞占比由造模前的37%降至

20%，而PTIP-/-小鼠造模前后T细胞占比无差异。此外，与PTIP-/-小鼠相比，

I

摘要

WT结肠炎小鼠脾的中性粒细胞、巨噬细胞和结肠B细胞减少，而M1型极化

巨噬细胞的数量明显增加。同时，PTIP-/-小鼠脾Tregs细胞的占比高于WT小

鼠，在肠中的占比则相反。ELISA结果显示，两组小鼠血清IgM造模后含量不

变，而血清IgG在造模后大幅下降，其中WT小鼠的血清IgG1水平下降了3

倍。回输WT血清后，PTIP-/-小鼠体内天然抗体IgG浓度显著性