靶向CD44和EGFR的多价抗体募集复合物的合成及活性评价.pdf

摘要

摘要

恶性肿瘤严重威胁人类的生命健康安全，目前常用的手术、化疗、放疗等治疗手段

缺乏靶向特异性，容易对正常细胞造成一定的损伤。由靶向结合端和抗体结合端构成的

抗体募集分子具有靶向肿瘤细胞和募集内源性抗体的双重功能，在肿瘤免疫治疗方面具

有巨大的应用前景。内源性抗体是人体内天然存在的抗体，如抗鼠李糖（Rhamnose,Rha）

抗体约占人体血清蛋白总量的2~8%。然而，单价抗体结合端募集内源性抗体的能力有

限，并且肿瘤细胞往往缺乏特异性靶点，容易造成靶向结合端的脱靶问题，影响抗体募

集分子的作用效果。

由于多价抗体结合端是进一步提高抗体募集能力的重要方向，双重靶向结合端是解

决脱靶问题的有效策略，因此可以通过构建双靶多价抗体募集分子来提升其作用效果。

鉴于此，本论文以环糊精修饰的透明质酸作为肿瘤标志物CD44的靶向配体，将其与抗

体募集配体Rha偶联。同时以金刚烷修饰的多肽GE11或纳米抗体7D12作为表皮生长

因子受体（Epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）的靶向配体，通过环糊精和金刚烷的

主客体相互作用将其偶联至透明质酸骨架，形成两种具有双靶特性的多价抗体募集复合

物。首先通过细胞免疫荧光、流式细胞术等实验对复合物的双靶特异性和抗体募集能力

进行表征。其次，通过补体依赖的细胞毒作用（Complement-dependentcytotoxicity，CDC）

和抗体依赖的细胞介导的吞噬作用（Antibody-dependentcellularphagocytosis，ADCP）

对复合物介导的抗肿瘤活性进行评估。主要研究内容和结果如下：

（1）多价抗体募集复合物主体分子的构建。通过化学法制备了氨基修饰的环糊精

β-CD-EDA以及氨基修饰的Rha衍生物Rha-PEG-NH，产率分别为33.13%和55.29%。

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通过酰胺缩合反应将环糊精和Rha衍生物偶联至透明质酸骨架得到主体分子Rha-HACD，

取代度分别为17.25%和38.96%。

（2）多价抗体募集复合物客体分子的构建。通过eSrtA酶介导的连接反应，将金刚

烷修饰至纳米抗体7D12的C端得到客体分子Ada-7D12，产率为70.03%。通过固相多

肽合成法制备另一种客体分子，即金刚烷修饰的多肽Ada-GE11，产率为57.85%。

（3）多价抗体募集复合物的制备。通过环糊精和金刚烷的主客体相互作用，将主体

分子和客体分子进行连接，形成两种多价抗体募集复合物。

（4）多价抗体募集复合物Rha-HACD/Ada-GE11的活性验证。通过流式细胞术和

免疫荧光等实验证明复合物能够特异性地识别表达CD44和EGFR的肿瘤细胞并将抗

Rha抗体募集至细胞表面。肿瘤细胞杀伤实验表明，复合物可以通过招募抗Rha抗体发

挥CDC和ADCP活性杀伤肿瘤细胞，CDC和ADCP活性分别为56.87%和42.75%。

（5）多价抗体募集复合物Rha-HACD/Ada-7D12的活性验证。细胞免疫荧光和流式

细胞术等实验分析表明，复合物可以特异性识别肿瘤细胞并招募抗Rha抗体。通过免疫

杀伤实验表明，复合物能够介导一定程度的CDC和ADCP效应，细胞杀伤率和细胞吞

噬率分别为58.71%和45.41%。

关键词：肿瘤靶向治疗；抗体募集；GE11；7D12；鼠李糖

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Abstract

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Malignanttumorsseriouslythreatenthelifeandhealthsafetyofhumanbeings.Currently,

commonlyusedtreatmentssuchassurge