临床微生物实验室规范化管理.ppt

4.脑脊液培养1．培养基：5%兔血巧克力琼脂、5%羊血琼脂。2．培养环境：35℃，5-10%CO2环境培养。第30页，课件共65页，创作于2023年2月5.分泌物培养1．培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、中国兰或伊红美兰、葡萄糖肉汤2．培养环境：35℃空气环境培养。第31页，课件共65页，创作于2023年2月6.胆汁或胸水或腹水1．培养基：如标本量大时可按血液培养方法直接取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本量有限，可接种5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、中国兰或伊红美兰、葡萄糖肉汤。2．培养环境：35℃空气环境培养。第32页，课件共65页，创作于2023年2月四.细菌鉴定规范操作1.涂片染色一．涂片染色：应具备最基本的两种染色技术，即革兰氏染色和抗酸染色。1革兰染色：革兰染色报告必须包括染色反应或微生物种类和类别，描述物种的形态或结构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，呈葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌丝。第33页，课件共65页，创作于2023年2月涂片染色2.抗酸染色：抗酸染色报告应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，报告中应以加号体现标本中抗酸杆菌的存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不典型抗酸杆菌+，建议再送标本。不能报告找到结核杆菌但可报告未找到结核杆菌第34页，课件共65页，创作于2023年2月2.趋向性鉴定试验革兰阳性球菌:触酶试验:3%H2O2用30%的H2O2稀释10倍后使用，避光4度保存；试验时设立阳性和阴性对照；1分钟内产生大量气泡为阳性。凝固酶试验：采用商品试剂或EDTA抗凝的多个兔混合血浆；测定玻片法测定凝聚因子10秒钟即可观察结果；测定凝固酶需在37度3-4h，若阴性还应放置24h再观察结果。第35页，课件共65页，创作于2023年2月革兰阴性杆菌:氧化酶试验建议用纸片法保存比较方便；试剂配制：1%盐酸四甲基对苯二胺水溶液阳性：由粉红变为蓝紫色为阳性对照：铜绿假单孢菌ATCC27853+大肠埃希菌ATCC25922-第36页，课件共65页，创作于2023年2月3.血清学试验肠道致病菌生化特征符合的前提下必须有血清学的试验作最后确认，基层细菌室应具备1-3项血清试剂。1.志贺氏菌多价和单价凝集血清：2.沙门氏菌多价和单价凝集血清3.致病性大肠杆菌多价和单价凝结血清第37页，课件共65页，创作于2023年2月4.真菌鉴定1．每一基层实验室必须开展真菌涂片，报告临床是否找到真菌；是否见到真菌菌丝；从形态辨别常见丝状真菌;区别曲菌或毛霉菌。2．开展酵母样真菌分离培养，应具备最基本的沙保弱培养基或用显色培养基，鉴别白念和非白念，隐球菌等。3.有条件的实验室应开展非培养的鉴定方法，如?-D葡聚糖的检测。第38页，课件共65页，创作于2023年2月五.药敏试验的规范操作1.用CLSI指南推荐的K—B药敏标准进行常规药敏试验判断。2.根据CLSI更新及时替换应用的标准。3.根据CLSI推荐的方法，开展重要耐药菌的检测，如MRSA、VRE、HLARE、ESBL。第39页，课件共65页，创作于2023年2月－纸片扩散法AST操作步骤制备接种物（0.5麦氏单位）接种（15分钟内接种，涂抹均匀）在接种好的琼脂平板上贴加纸片孵育（15分钟内反转平板，35°C空气孵育）苛养菌5％CO2孵育判断结果和解释结果第40页，课件共65页，创作于2023年2月AST－纸片扩散法判读结果将游标卡尺置于反转的平板的背面，测量到最接近的整数毫米数。平板应距离一个黑色不反光的背景，并用反射光照明。如果是加血的琼脂培养基，则应在透射光照射下，打开培养皿盖，从上表面测量抑菌圈。如果被测菌是葡萄球菌或肠球菌，则应孵育24小时，再在透射光下分别观察苯唑西林或万古霉素的透明抑菌圈内有无耐甲氧西林或耐万古霉素菌落的微弱