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Tris-HCl及其他几种缓冲液配方

Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？

Tris：三羟甲基氨基甲烷

三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应

????Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。

Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。

????由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成

1MTris-HCl(pH7.4，7.6，8.0)

组份浓度??1MTris-HCl

配制量??1L

配制方法：

1.称量121.1gTris置于lL烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。

pH值???浓HCl

7.4??????约70ml

7.6??????约60ml

8.0??????约42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5MTris-HCl(pH8.8)???????

组份浓度??1.5MTris-HCl

配制量??1L

配制方法??

1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓HCl调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

TE即Tris-EDTAbuffer（10mMTris，1mMEDTA，pH7.4pH7.6pH8.0）。

常用分子生物学试剂，用于DNA的溶解等。

配制10×TEBuffer(pH7.4,7.6，8.0)???

组份浓度：??100mMTris-HCl，10mMEDTA

配制量：1L

配制方法：

量取下列溶液，置于lL烧杯中。

1MTris-HClBuffer(pH7.4，7.6，8.0)??????100ml

500mMEDTA(pH8.0)??????20ml

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。?

3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。