液相层析分离法.ppt

硅胶的结构为:第60页，课件共87页，创作于2023年2月硅胶活性的测定：称取二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各40mg溶于100mL苯中，将此混合液滴加于薄层上，用石油醚展开10cm，混合物应不动；如用苯展开，则应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红0.19，靛酚蓝0.08（展层时间30~45min），则认为此硅胶合格。经本法测定的活性与Al2O3活性Ⅱ~Ⅲ级相当。第61页，课件共87页，创作于2023年2月定量剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪器方法（如红外、紫外、原子吸收、发射光谱），也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。比较法：经纸色谱将各种组份分开后，可在相同条件下，制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、面积进行比较，确定其可能的含量。反射散射光谱法：

?第28页，课件共87页，创作于2023年2月物质受光照射时，通常发生两种不同的反射现象（即镜面反射与散射）。镜面反射同镜子反射一样，光线不被物质吸收，反射角等于入射角；散射则必须满足Kubelka-Munk方程式：

其中，R=IR/I0，I0、IR分别为入射光与散射光强度，S为反射系数，K‘’为线性吸收系数，?为被测物的摩尔吸光系数，C为被测物的物质的量浓度，K‘=?/S。仪器上显示的反射散射吸收值为AR=lgI0/IR=lg1/R。由上可建立方程组：第29页，课件共87页，创作于2023年2月?

?

（2）式代入（1）式，得：（3）式即为反射散射吸收光谱测量值F与C的定量关系；若以F为纵坐标、C为横坐标，则可得一截踞为2的直线，斜率为K。第30页，课件共87页，创作于2023年2月图1.反射散射附件的光路示意图M:反射镜;S:样品:PC:光电管1234sMPCM1－长颈漏斗，2－滤纸，3－垫板，4－抽滤瓶第31页，课件共87页，创作于2023年2月F.应用例１．氨基酸的分离（固定相为水）流动相分离情况正丁醇：2mol/LHAc=1:1酪氨酸、二碘酪氨酸用水饱和的苄醇亮氨酸、异亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水＝16:16:0.1:3.9亮氨酸、异亮氨酸第32页，课件共87页，创作于2023年2月流动相分离情况２－丁醇：醋酸：水＝32:2:22甲状腺素、二碘酪氨酸流动相１：丁醇：HAc:H2O=4:1:5流动相２：M－甲酚－酚：pH=9.33硼酸缓冲液=1:1亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、胱氨酸等第33页，课件共87页，创作于2023年2月例2.糖的分离(固定相为水)流动相分离情况醋酸乙脂:吡啶:水=2:1:1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水=45:25:40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水:NH3=40:10:49:1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水=10:1:2蜜二糖、果糖、葡萄糖、第34页，课件共87页，创作于2023年2月流动相分离情况流动相１：酚流动相２：丁醇:醋酸:水=1:1:1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水=4:1:5低聚糖75%2－丙醇：醋酸＝9:1直链淀粉丁醇:吡啶:水：苯=50:30:3:45棉子糖第35页，课件共87页，创作于2023年2月例３．脂肪酸的分离（固定相为水）流动相分离情况95%乙醇：浓氨水＝100:1同系的直链脂肪酸正己醇：1.5mol/L氨水＝1:1烷氧基酸流动相1:乙醇：浓氨水:H2O=80:5:15流动相2：乙二醇乙醚：桉树脑：88%甲酸=5:5:2草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸第36页，课件共87页，创作于2023年2月流动相分离情况丁醇：醋酸：水＝4:1:5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯苄胺甲醇：戊醇：苯：水＝4:2:2:2－萘胺、间苯二胺、对苯二胺、苯胺丁醇：1.5mol/L氨水＝1:1C7以下的脂肪酸例4.胺类的分离（固定相为水）第37页，课件共87页，创作于2023年2月例5.醇、酚的