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细菌普通染色和革兰氏染色

生命科学学院生02孙禹2010012376

实验日期：2012-3-12同组姓名：张宇成

一、实验目的

1、掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤

2、掌握革兰氏染色法的操作步骤和关键点

3、识别细菌的革兰氏染色结果

4、学习无菌操作技术

二、实验原理

本次实验的主要内容是学习革兰氏染色方法。这一方法由丹麦病理学家ChristainGram

+-

于1884年创立，通过革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌(G)和革兰氏阴性菌(G)两

大类。这也是鉴别菌种的重要方法。

革兰氏染色的原理主要是由于不同细菌细胞壁的结构不同所致：

+

革兰氏阳性菌(G)：细胞壁肽聚糖较厚，媒染剂可以和结晶紫形成复合物保存在细胞内，

且经乙醇处理细胞壁孔径减小，难被番红再次染色，因而呈现紫色。

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革兰氏阴性菌(G)：肽聚糖层很薄，脂肪含量高。乙醇能够使细胞壁更加疏松，且通透

性增加。因而结晶紫颜色容易被脱去，经番红染色后呈现红色。

另外，酵母菌也可被染色，且呈现革兰氏阳性结果。

图一革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁差异示意图

占细胞壁的干重(%)

对比项目

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G细菌G细菌

肽聚糖含量很高(30-95)含量很低(5-20)

磷壁酸含量较高(50)0

类脂质一般无(2)含量较高(约20)

蛋白质0含量较高

染色结果紫色红色

表一革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌对比

1

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三、实验仪器、材料和用具

1、实验仪器和用具

显微镜、擦镜纸、镜油、擦镜液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、吸水纸、镊子、

打火机、相机(自带，CanonPowerShotA580)

2、实验药品

结晶紫、革氏碘染液、95%乙醇脱色液、番红染液

3、实验样品

枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和未知菌的18小时的液体培养液

酵母菌平板、大肠杆菌平板、牙垢

四、实验步骤

本次实验可分为简单染色和革兰氏染色，通过简单染色学习基本的无菌操作技术，并

练习细菌涂片标本的制备方法，包括操作规范、涂片、固定等。革兰氏染色主要学习染色的

基本操作步骤，并以此鉴定菌种呈现革兰氏阳性或阴性结果。

1、简单染色

①载玻片处理：用镊子取在75%酒精中浸泡的载玻片，用吸水纸吸取酒精，在火焰上

烘烤准备涂菌部位，除去油脂