DB41T2607-2024蓝莓组培快繁技术规程.docx

ICS65.020.20CCSB05

ICS

65.020.20

CCS

B05

河 南 省 地 方 标 准

DB41/T2607—2024

蓝莓组培快繁技术规程

2024

2024-02-01发布

2024-05-01实施

河南省市场监督管理局

发布

DB41/T2607

DB41/T2607—2024

DB41/T2607

DB41/T2607—2024

目 次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4培养基的选择与改良 1

5外植体的选择与接种 2

6苗木培养 2

7炼苗与移栽 3

附录A（资料性）改良WPM培养基配方 4

I

I

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由河南省林业局提出并归口。

本文件起草单位：平顶山市农业科学院鲁山县瑞祥种植农民专业合作社平顶山市农业农村局平顶山市林业局内黄县林业发展中心。

本文件主要起草人：周威、曹秀敏、梁建、张佳伟、姬书惠、余祖运、许俊国、岳高飞、曹青军、栗苗苗、张九林、李蕴莹、王新兰、郭克歌、冯晓艺、蒋钦群、肖婉露、法丹丹。

II

II

蓝莓组培快繁技术规程

范围

本文件规定了蓝莓苗组培快繁过程中培养基的选择与改良、外植体的选择及接种、苗木培养、炼苗与移栽等。

本文件适用于河南省蓝莓组培种苗的繁育。

规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

培养基的选择与改良

WPM培养基的改良

将WPM培养中的K2SO4、CaCL2、FeSO4、Na2EDTA改成KNO3（190mg/L）、Ca(NO3)2.4H2O（684mg/L）、

C10H13FeN2NaO8（73.4mg/L）。

改良WPM培养基的母液配制

将改良WPM培养基的化学成份按附录A所示的五大类分别用蒸馏水溶解后，配制成质量比为1:20、1:100、1:200、1:200、1:200的母液，装入广口瓶，母液配制宜使用蒸馏水或去离子水。分别贴上标签、标注名称、配制倍数和日期，置于2℃～4℃冰箱保存，铁盐应存放在棕色容器中。

激素的母液配制

将实验所需的玉米素(zeatin，ZT)、萘乙酸((1-naphtahaleneacetinacid，NAA)、吲哚丁酸(indole-3-butyric，IBA)用1mol/L的HCl或95％酒精溶解，再用蒸馏水稀释后分别配制成100mg/L的母液，装入棕色广口瓶中，置于2℃～4℃冰箱保存。

配制培养基

溶解琼脂、糖

按所需容量的70％加蒸馏水，再加入0.65％的琼脂，加热搅拌融化琼脂。琼脂融化后，加入3％蔗糖，稍加热使其溶解。

添加母液

糖溶解后，按培养基的配方及所需数量，依次加入改良WPM培养基母液和激素母液，并充分搅拌。

1

定容、调pH值

搅拌均匀后，加蒸馏水定容至所需体积。再充分搅拌，用0.1mol/L的盐酸或0.1mol/L的氢氧化钠调节pH至5.2±0.1。

芽诱导培养基：改良WPM＋ZT5.0mg/L＋蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L。

增殖培养基：改良WPM＋ZT1.0mg/L＋IBA0.1mg/L＋蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L。生根培养基：1/2改良WPM＋IBA0.1mg/L＋蔗糖25g/L，琼脂粉6.5g/L。

以上三种培养基，pH值均为5.2±0.1。

外植体的选择与接种

外植体的选择

取材时间和部位

取材应于春、秋两季蓝莓生长的旺盛时期，在晴朗的上午或午后没有露水时取材，避免低温阴雨天气取材。从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、生长健壮、带有3～5个完整叶片的新生枝条，装入洁净的塑料袋封口带回实验室，2℃～4℃冰箱保湿存放，所取材料2d内使用完毕。

外植体预处理

用剪刀将嫩枝上的叶片剪下，用洗涤剂刷洗后，经自来水冲洗30min～40min，无菌滤纸吸干水分备用。

外植体的消毒与接种

在用酒精消毒过的超净工作台面上，将清洗后的叶片一起先放入75％乙醇溶液中振荡浸润30s～40s，无菌水冲洗4次，无菌滤纸吸干水分后，用0.1％的升汞消毒6min～8min，再用无菌水冲洗5次～6次，无菌滤纸吸干水分备用。

将已消毒的幼嫩叶片置于无菌滤纸上，把叶片切成1cm见方的小块，接种到灭菌过的诱导培养基中，每瓶接种3～4个材料，向下稍微按压，让切口充分接触培养基。

苗木培养

芽诱导培养及方法

将外植体叶片接种到灭菌过的芽诱导培养基中培养，培养温度为2