大肠杆菌生理生化鉴定.pdf

大肠杆菌生理生化鉴定路线：

氧化酶（-）→苯丙氨酸脱氨酶（-）→HS（-）→DNA酶（-）→乳糖（+）→柠檬酸盐（-）

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→D-阿东醇（-）→赖氨酸脱羧酶（+）→纤维二糖（-）

1、氧化酶巴氏杆菌

1、原理：

氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色

素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。

2、试剂

盐酸二甲基对苯撑二胺(或四甲基对苯撑二胺)1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中贮存。

3、方法

在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液，仅使滤纸湿润即

可，不可过湿，用金丝接种环(不可用镍铬丝)取18~24h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在

10s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）10~60s现红色者为延迟

反应，60s以上现红色者不计，按阴性处理。

4、注意事项：

a.盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变

为红褐色，即不宜使用。

b.铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳

性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。

c.在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延

长了反应时间，造成假阴性。

2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌

1、原理：

某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，

苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。

2、培养基

酵母膏3g

NaCl5g

NaHPO1g

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DL-苯丙氨酸2g

(或L-苯丙氨酸)1g

蒸馏水1000ml

pH为7.0，分装试管，121℃蒸气灭菌10min,摆成长斜面。

3、试剂

10%(W/V)的FeCl3溶液

4、方法

适当浓度接种，37℃培养4h或8~24h测定。将试剂4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜

面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。

3、HS(TSI)变形杆菌鸡白痢沙门氏

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1、原理：

有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐

或低铁盐可生成黑色沉淀物。

2、培养基：

牛肉膏7.5g

蛋白胨10g

NaCl5g

明胶100~120g(或琼脂15g)

10%FeCl(培养基灭菌后无菌加入)5ml

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蒸馏水1000ml

pH7.0，112℃灭菌20min

在明胶培养基尚未凝固时，加入新制备的过滤灭菌的FeCl，用无菌试管分装，培养基

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高度约为4~5cm，立即置冷水冷却凝固。

3、方法

用穿刺法接种，30℃培养，1、3、7天，观察，变黑者为阳性，不变为阴性。

4、注意事项

①此方法适用于肠杆菌科细菌鉴定

②在实验过程中可用硫酸亚铁代替氯化亚铁

③可同时测定明胶液化，20℃培养

4、DNA酶金黄色葡萄球菌

1、培养基

酪朊水解物15g

大豆蛋白胨5g

NaCl