高效液相色谱分析.pptx

高效液相色谱分析;第一节高效液相色谱法概述

Generalizationofhighperformanceliquidchromatograph;高效液相色谱法:以液体作为流动相得色谱法。她就是在经典液相色谱实验基础上,引入气相色谱得理论,在技术上采用高压输液泵,高效固定相和高灵敏得检测器,而发展起来得快速分离分析技术。具有分离效能高,检出限低,操作自动化和应用范围广得特点。;(一)、HPLC与经典LC区别;(二)、HPLC与GC异同点;流动相差别

GC:流动相为惰性气体

组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用。

HPLC:流动相为液体

组分与流动相和固定间有亲合作用力,为提高柱得选择性、

改善分离度增加了因素,对分离起很大作用。

流动相种类较多,选择余地广

流动相极性和pH值得选择也对分离起到重要作用

选用不同比例得两种或两种以上液体作为流动相

可以增大分离选择性;二、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph;液相色谱仪(1);液相色谱仪(2);液相色谱仪(3);液相色谱仪(4);大家有疑问的，可以询问和交流;美、瓦里安Prostar210高效液相色谱仪;三、高效液相色谱法得特点和应用;四、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC;2、主要部件P83;(2)梯度洗提(淋洗、洗脱)装置;(3)进样装置;(4)高效分离柱;理想得HPLC检测器应具有如下特性:

???

第一,具有高灵敏度和可预测得响应;

第二,对样品所有组分都有响应,或具有可预测得特异性,适

用范围广;

第三,温度和洗脱液流速得变化对响应没有影响;

第四,响应与洗脱液组成无关,因此可作梯度洗脱;

第五,死体积小,不造成柱外谱带扩展;

第六,使用方便、可靠、耐用,易清洗和检修;

第七,响应值随样品组分量得增加而线性增加,线性范围宽;

第八,不破坏样品组分;

第九,能对被检测得峰提供定性和定量信息;

第十,响应时间快。;分类标准;按

测

量

原

理

分;a、紫外检测器

应用最广,对大部分有机化合物有响应。

特点:

灵敏度高;

线形范围高;

流通池可做得很小(1mm×10mm,容积8μL);

对流动相得流速和温度变化不敏感;

波长可选,易于操作;

可用于梯度洗脱。

;b、光电二极管阵列检测器;光电二极管阵列检测器;c、示差折光检测器

(differentialrefractiveindexdetector);示差折光检测器;d、荧光检测器

(fluorescencedetector);一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatograph

二、液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatograph

三、离子交换色谱

ion-exchangechromatograph

四、离子色谱

ionchromatograph

五、离子对色谱

ion-pairchromatograph

六、排阻色谱

size-exclusionchromatograph

七、亲和色谱(AC)

Affinitychromatograph;一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography;二、液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatography;固定相有机基团主要有三类:

1、疏水基团:如不同链长得烷烃(C8,C18,C6等)。

2、极性基团:如丙胺基,氰乙基,醚和醇等。

3、离子交换基团:如作为阴离子交换基团得胺基,季铵盐。作为阳离子交换基团得磺酸基等。;三、离子交换色谱P73

ion-exchangechromatography;流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶液;阳离子离子交换树脂作固定相,采用碱性水溶液;

基本原理:组分在固定相上发生得反复离子交换反应;组分与离子交换剂之间亲和力得大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大,保留时间长。

阳离子交换:

阴离子交换:

离子交换反应达到平衡时,保留值决定于平衡常数。

容量因子k’与平衡常数Kx成正比,且与流动相中得反离子浓度(Na+、Cl-)成反比。

应用:离子及可离解得化合物,氨基酸、核酸、蛋白质等。;四、离