肺结核的新诊断技术课件.pptVIP

新诊断技术及其在NTP中的应用江苏省结核病参比实验室NTP中现行实验室技术涂片：萋尼染色显微镜检培养：固体培养基：简单法、离心法药敏：固体培养基：绝对浓度法、比例法菌种鉴定：鉴别培养基＋生化试验传统实验室技术不能适应不断深入的结核病防治工作的需要实验室新诊断技术总览细菌学检测方法发光二极管荧光显微镜（LED）液体培养分子生物学检测方法GenexpertHAINGenechip免疫学检测方法ELISOPTTSPOT和Quantiferon血清学诊断方法荧光比色(MIGIT)(MBBactAlert)RutheniumcomplexCO2pH液体培养BACTECTB460原理：标本经前处理接种至含有14C-棕榈酸的12B培养基，37C培养。分枝杆菌分解14C-棕榈酸，产生14CO2，BACTECTB460仪自动检测，14CO2含量，并换算成生长指数（GI）。优点：快速：将分离培养的阳性检出时间由常规培养所需的2-8周缩短至3-14天，将药敏试验的报告时间由常规方法的4周缩短至1周。操作简便、灵敏度高，可进一步做药敏试验、菌种初步鉴定。缺点：放射性同位素污染。仪器与试剂价格昂贵。未实现全自动化污染率高原理：是BACTECTB460的换代产品。标本经前处理后接种到系统配套的液体培养基，该培养基中包被有对氧浓度敏感的荧光物质，当细菌生长代谢消耗培养基中的氧时，氧浓度降低，荧光被激发，系统可以连续检测荧光水平，自动报告结果。优点：系统进一步优化，操作更简便、自动化更强。解决了BACTECTB460的同位素污染问题。24小时连续检测，有利于早期报告阳性结果。缺点：仪器与试剂价格更昂贵。未能解决高污染率的问题BACTECMGIT960

分枝杆菌生长指示管LED显微镜发光二级管(LED)技术提供价廉、稳定的光源寿命150,000h反复开关不影响寿命不释放有毒气体不需要暗室操作人员工作负荷减轻快速药敏-商业化线性探针检测（LPAs）GenoType?MTBDRplus,HAIN检测结核分枝杆菌复合群以及利福平、异烟肼耐药相关的突变检测XDR的试剂盒也已经发布INNO-LipaRifTB检测结核分枝杆菌复合群以及于利福平耐药相关的突变大多数利福平耐药的菌株同时也耐异烟肼WHO鼓励使用的工具可使用涂阳痰标本和培养物进行操作快速、简便易用，仅需基本PCR技术然而，价格比较昂贵，且不能检测造成耐药突变的热点区域外的突变*MTBDRplus操作流程DNA提取用NALC/NaOH处理痰标本2)PCR扩增3)杂交扩增产物和固化在膜上的特异性探针杂交4)结果判读rpoB野生型探针:WT1-WT8rpoB突变探针:MUT1-3:D516V,H526Y,H526D,S531L→野生型缺失→野生型突变MTBDRplusrpoB511513516518522526531533rpoBWT2rpoBWT4rpoBWT6rpoBWT8rpoBWT7rpoBMUT1(D516V)rpoBMUT3(S531L)rpoBMUT2A(H526Y)rpoBMUT2B(H526D)514515rpoBWT1rpoBWT3rpoBWT5509508505katG基因突变MTBDRpluskatGMTBDRplusinhAinhA基因突变MTBDRplus反应条带(示范)南非的经验：GenotypeMTBDRplusassay:直接从涂片阳性标本中检测rpob基因突变(耐利福平),katG基因(高浓度异烟肼耐药),inhA基因(低浓度异烟肼耐药)灵敏度、特异度，阳性预测值、阴性预测值耐利福平98.9,99.4,97.9,和99.7耐异烟肼94.2,99.7,99.1,和97.9耐MDR-TB98.8,100,100,和99.7BarnardM,etal.AmJRespirCritCareMed2008;177:787-92结核耐药检测基因芯片激光共焦扫描仪软件判读结核耐药检测芯片获北京市自主创新产品证书样品制备仪杂交仪通量：两个一线抗结核药速度：6小时（比传