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BiochemistryandmolecularbiologyexperimentsⅧ李宇婷遵义医学院生化教研室牛血清白蛋白的提取与鉴定Extractionandidentificationofbovineserumalbumin（Alb）
总操作步骤小牛血清0.5ml+PBS0.5ml+饱和硫酸铵2.3ml混匀，静止10min，3000rpm/min离心10min（取出离心机时勿晃动）取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），放入装有自来水的小烧杯中透析，要不断快速振动，每1min，换一次水，共换水20次。电泳在膜条无光面用铅笔划点样线和两位数的学号,并在点样线上作好两个标记圆点（b和c），取两颗毛细管分别将标准液及样品液点在b和c上（分别在膜条上停留3秒），标准液点1次，样品液点3次（完全重叠）。电泳将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染料中，染2min取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min，直至背景漂洗干净为止。透析将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时无光泽面向下，点样端置于阴极，平衡5min，开电源160V25min，关闭电源后用镊子将膜条取出。染色直接将电泳后的膜条作为实验结果，贴在报告上点样盐析学号1.5cmBC观察
结果分析描述：条带形状、相较于标准品的位置、有无杂带分析：上样量太多目的条带后有杂带（球蛋白）考试满分卷目标条带清晰独立与标准条带平齐无杂带上样量太多两条带相连不独立①白蛋白提取成功否？→出现与标准品平齐的条带，色度宽度与标准带相似②白蛋白纯不纯？→有无杂带③杂带是什么？→看其出现的位置，分析是球蛋白还是其他④为何会出现杂带？→上清中混有球蛋白沉淀、盐析时盐浓度不够或者其他
注意事项取上清透析时，若倒出沉淀，则Alb提取不纯，出现球蛋白杂带透析若未彻底，盐离子会使电泳慢，条带拖尾等膜条划线时，注意选择无光面，轻柔，避免膜的破裂点样时，样品接触膜表面即可，切忌使劲按压，避免戳破漏样画点样圈的意义在于，使样品完全重叠，避免拖尾现象膜条上桥，点样端放负极，边缘15cm在桥上，且拉直，避免掉下点样后，毛细吸管需回收，标准吸管放回原处，样品吸管放入回收烧杯→扣分点：试剂盘的摆放、电泳结果、报告的完整性和丰富性→交报告：每人独立操作实验，独立完成实验报告，下课即交报告本次课考试，老师不做任何讲解，学生独立完成实验
Nextweek--课堂讨论分组：4人/组题目：每个实验班有4个题目各个小组准备相同的4个题目（每组随机抽查进行汇报，严禁抄袭）分数：满分100分（百分制，折算期末总成绩的10%）要求：1.学生提前一周认真制作PPT，课上汇报，时间为15-20分钟2.提问及回答环节（教师、学生提问）3.教师根据学生表现现场打分4.下课前半小时，所有学生都要写心得，不少于500字，当场交。（带实验报告纸）
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