级DNS法测定还原糖含量最终版课件.ppt

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DNS法测还原糖含量——3,5-二硝基水杨酸法

目的掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法

原理1.还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖。2.在NaOH和丙三醇存在下,DNS与还原糖共热后被还原生成氨基化合物,在过量的碱性溶液中此化合物呈桔红色,在一定范围内,还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在550nm波长下测定吸光度,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。3.由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

反应化学方程式——桔红色黄色

实验材料、主要仪器和试剂1、试剂(1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100mL(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3gDNS和262mL2Mol/LNaOH溶液,加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用。

(3)碘-碘化钾溶液(4)6mol/lNaOH(5)0.1%酚酞指示剂(6)6mol/lHCl溶液2、材料淀粉3、器材分光光度计,天平,水浴锅,电子万用炉,试管若干

锥形瓶(0.5g面粉+10ml盐酸+蒸馏水15ml)加热30min检验水解是否完成(I-KI溶液)冷却至室温后中和并定容到50ml过滤取10ml于100ml容量瓶取滤液又定容至刻度(即为稀释50倍)三.总糖提取

四、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液/ml01.01.0蒸馏水/ml2.01.01.0水杨酸/ml1.51.51.5将各管溶液混合均匀后在沸水中加热5min,取出后立即用冷水冷却至室温,在向各管加入21.5ml蒸馏水,摇匀在波长为550nm处测定吸光度,并比对标准曲线得出糖的含量

结果处理按下列公式计算样品中还原糖与总糖的百分含量:还原糖%=(m*100)/(M*1000)总糖%=(m*稀释倍数*0.9*100)/(M*1000)式中:m——根据标准曲线所得糖含量,mgM——所称样品质量,g

祝实验成功!Theend谢谢!!

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