第二章-薄层色谱法.ppt

第一章思考题第二章薄层色谱法第一节概述薄层色谱法(thinlayerchromatograph,TLC);历史薄层色谱法的特点1、不需要特殊设备，固定相一次性使用；2、对被分离物质的性质没有限制，应用范围广；3、具有多柱路效应，可同时进行多个样品的分离；4、同一色谱上可根据被分离化合物的性能选择不同显色剂或检测方法；5、固定相特别是流动相可选择的范围宽，有利于不同性质化合物的分离。第一节概述薄层色谱法的理论基础一、流速展开剂液面到前沿的距离L：展开剂前沿移动的速度Uf应为：k与实验条件的关系式如下：k展开剂速率常数（动力学特征）；k0为渗透常数；dP为平均颗粒直径；g为展开剂表面张力；h为展开剂黏度；q为展开剂与固定相两相间的接触角。第一节概述二、分离参数1、分离度（resolution）：2、比移值(Rf)是薄层色谱的基本定性参数。当Rf值为0时，表示组分留在原点未被展开;Rf为1时，表示组分随展开剂至溶剂前沿，即组分不被固定相吸附（保留）。第一节概述高比移值（hRf）:即Rf×100为避免Rf偏小，值在0—100相对比移值Ris，被分离组分与所选组分与所选参比物Ri的之比(相对比移值较稳定)（可大小1或小于1）第一节概述三、塔板理论1、高效薄层板的理论塔板数：N为理论塔板数；LS为物质S在板上的移动距离；WS为S物质斑点直径；Rf为物质S的比移值。2、薄层色谱板的有效理论塔板数：W0为样品原点的峰宽。3、有效板高Heff：第二节薄层色谱法的操作技术一、薄层色谱的仪器材料1、吸附剂：氧化铝、硅胶、乙酰化纤维素、聚酰胺等。2、薄层板和展开缸：薄层板：玻璃、金属片和塑料。展开缸：单层和双层。第二节薄层色谱法的操作技术二、薄层板的制作软板：不加黏合剂的干法制板。硬板：使用黏合剂的湿法制板。三、点样1、样品溶液的配制：0.1%～1%，选用易挥发、遇热不易破坏和不易扩散的溶剂溶解（溶解度适当），选用与展开剂极性相似的溶剂。2、点样：手动点样：点样位置在薄层板下端1cm处，样品之间间隔1～1.5cm。自动点样：AutomaticTLCSample(ATS4)自动点样仪等。第二节薄层色谱法的操作技术1、展开方式一维展开（3种）、二维展开（2种）。2、展开剂的选择第一步选择展开剂有合适的溶剂强度；第二步提高展开剂的选择性。第二节薄层色谱法的操作技术五、定位和显色1、显色方法：光学（自然光、紫外光和荧光）、蒸汽和试剂显色法。2、显色剂：有机化合物的通用试剂；专属性显色剂。六、薄层板结果的记录作图记录：按比例画出薄层板，标出原点、展开后斑点和溶剂前沿位置，写出薄层吸附剂规格、展开剂成分、展开剂试剂规格、样品信息、显色剂成分和显色后斑点颜色，并记录下当时的环境条件，可用数码相机进行照相保存。第三节定量薄层色谱法和制备薄层色谱一、薄层定量分析1、目视比较法：标准品，样品和标准品点在同一薄层上展开，显色后，目测比较斑点颜色的深浅和面积大小，精密度为±10％。2、洗脱测定法：a、定位：直接定位，对照法b、洗脱测定：将斑点取下，然后用洗脱剂所洗脱。第三节定量薄层色谱法和制备薄层色谱3、薄层扫描法：a、薄层扫描仪的基本原理－Kubelka-Munk方程式薄层上斑点的透光度：T=b/(asinhbSX+bcoshbSX)薄层上斑点的反射度：R=sinhbSX/(asinhbSX+bcoshbSX)SX为薄层板的散射参数，与固定相的种类、粒度、薄层厚度(X)及涂布均匀程度有关；a、b可分别表示为：K为单位薄层厚度的吸光系数，KX为吸收参数，相当于薄层色谱斑点单位面积中物质的含量（mg/cm2)第三节定量薄层色谱法和制备薄层色谱第三节定量薄层色谱法和制备薄层色谱c、Kubelka-Munk曲线说明薄层色谱斑点的吸光度与其浓度间呈非线性关系。曲线校直法（岛津CS系列）根据薄层板的SX值将K－M曲线校正为直线。回归法（Camag仪器）。第三节定量薄层色谱法和制备薄层色谱d、测定方法吸收测定法：200～800nm选择合适的波长，用透射法、反射法或透射－反射法三种方法检测。荧光测定法：灵敏度高于吸收测定法100～1000倍，但适用范围窄。e、测光形式与扫描方式单波长单光束/双光束双波长单光束/双光束直线扫描、锯齿扫描、圆形扫描、倾斜扫描和多通道自动扫描等。