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【干货分享】新版《中国药典》中关于非无菌产品微生

物限度检查的要点

新版《中国药典》中对非无菌产品的微生物限度及检查方法

等都做出了相关要求，本文对其要点进行了整理，供大家参考。

微生物计数法

1、微生物计数法用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真

菌的计数。

2、微生物计数法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否

符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括

样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于

活菌制剂的检查。

3、微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

4、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止

污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

5、洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

6、如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。

7、供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有

效性及对微生物无毒性。

8、供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对生物

无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。

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计数方法

1、计数方法包括平皿、薄膜过滤法和最可能数法(Most-

Probable-NumrberMethod，简称MPN法)，MPN法用于微生物

计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，

MPN法可能是更适合的方法。

2、供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标

准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验

结能够判断供试品是否符合规定。

3、所选方法的适用性须经确认。

计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验

1、供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

2、供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确

认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

3、若检验程序或产品发生变化可影响检验结果时，计数方

法应重新进行适用性试验。

菌种及菌液制备

1、菌种

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（1）试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中

心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进

行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

（2）计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株

见表1。

表1试验菌液的制备和使用

2、菌液制备

（1）按表1规定程序培养各试验菌株。

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（2）取金黄色葡球菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、白

色念珠茵的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或

0.9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜

培养物加人适量含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯

化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％

无菌氯化钠液，将孢子洗脱。

（3）采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含

0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液

或含0.05％(ml/ml)聚山梨80的0.9％无氧化钠溶液制成适宜

浓度的黑曲霉孢子悬液。

（4）菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若

保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲毒孢子悬液可保存

在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。

3、阴性对照

为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性

对照试验应无菌生长，如阴性对照有菌生长，则应进行偏差调

查。

4、培养基适用性检查

（1）微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基

或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

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（2）按表1规定，接种不大于10