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平板菌落计数

一、 实验目的

学习平板菌落计数的基本原理和方法。

二、 实验原理

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2?3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（colony-formingunits，。如）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。

三、 实验器材

1.菌种大肠杆菌菌悬液，中性植酸酶产生菌菌悬液。

培养基牛肉膏蛋白胨培养基，植酸酶产生菌筛选培养基。

仪器或其他：移液器，无菌平皿，恒温培养箱等。

四、 实验步骤

l?编号

取无菌ependorf管7个，分别用记号笔标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，10-7向每个ependorf管移取900pL无菌水。

稀释

用100RL移液器分别吸取100RL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液和中性植酸酶产生菌菌悬液（待测样品），精确地放至10-1的ependorf管中，此即为10倍稀释。将10-1ependorf管上下颠倒，使菌液充分混匀。另100pL移液器吸取10-1菌液100pL，精确地放10-2ependorf管中，此即为100倍稀释。……其余依次类推。

放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。

倒平板.

制备LB平板和植酸酶产生菌筛选培养基平板。

涂布

分别吸取10-5、10-6、10-7的稀释菌悬液各100PL，对号放入编好号的无菌平板中，每个稀释度做三个平行。接着用灭菌后的玻璃涂棒均匀涂抹。静置5分钟后，将平板倒置于相应恒温培养箱中培养。

计数

培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数。

五、 实验结果

分别将培养后菌落计数。

六、实验思考题

（1）为什么融化后的培养基要冷却至45r左右才能倒平板?

试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。

当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出

在哪里？