血浆Septin9基因甲基化检测在结直肠癌诊治中的应用.docxVIP

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血浆Septin9基因甲基化检测在结直肠癌诊治中的应用

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摘要：目的:引进血浆Septin9基因甲基化检测技术，提高本院结直肠镜的受检率，为本地区结直肠癌(colorectalcancer，CＲC)的早筛、早诊、早治、疗效判断和复发监测提供有力的实验室依据，有效提升本地区结直肠癌的综合防治水平。方法：分析2018年1月开展至今的1972例Septin9基因甲基化检测结果，对阳性结果随访并进行结直肠镜检查。结果：健康体检职工血浆Septin9基因甲基化阳性率为2.96%（12/405），消化科患者、中西医肿瘤科患者、感染科患者血浆Septin9基因甲基化阳性率分别为14.29%（17/119）14.84%（38/256）和15.68%（8/51），差别有显著性（P0.05）。结论：血浆Septin9基因甲基化检测技术以其采样方便、患者依从性好，灵敏度和特异性均较高的技术优势提高我院结直肠镜受检率，我院自2018年1月引进入疆并在临床推广应用，填补疆内空白，为结直肠癌的早筛、早治、疗效判断、复发监测等提供辅助诊断依据。

关键词：结直肠癌；Septin9；基因；甲基化检测

结直肠癌是结直肠黏膜上皮恶性肿瘤，结直肠癌（CRC）的发病率位居我国乃至全球各类恶性肿瘤第三位，其发病率和死亡率有逐年上升趋势，有效的早期筛查、诊断、复发监测及尽早干预治疗是CRC防治的关键。早期诊断CＲC能显著改善预后，但60%～70%的CＲC患者诊断时已进展至晚期。粪便血试验(facalimmunochemicaltests，FIT)、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)和肠镜是目前临床上最为常用的筛查手段，但FIT易受干扰因素影响，假阳性率高；CEA特异性低，更适合疗效监测；肠镜检查侵入性强，患者接受率不高［1］。所以，寻找更好的检测标志物就显得尤为重要。最近研究发现CRC的发生、发展与基因的甲基化密切相关。Septin9基因与CRC发生密切相关，在癌组织中呈高度甲基化，是CRC发生发展过程中重要的分子标志物，研究发现，Septin9基因甲基化存在于90%以上的CＲC癌组织中，且其Septin9基因甲基化程度远高于良性肿瘤和正常肠道组织，使得Septin9基因甲基化检测有望成为新的CＲC诊断指标［2］。结直肠癌的发生、发展是一个多因素影响、多基因参与并需经历多阶段演变的复杂过程，肠癌发展进程由增生、小腺瘤、大腺瘤、重度非典型增生、早期腺癌、晚期腺癌等阶段，大约需要5-10年的疾病发展期，临床症状出现时间晚，国民早期筛查意识差，无症状不检查，往往错过最佳治疗期。医界共识：早发现、早诊断、早治疗是防治癌症最有效的方式。目前结直肠癌体外筛查的方法有CEA、粪潜血和肠镜检查。CEA、粪潜血灵敏度较低，肠镜筛查虽然是临床筛查肠癌的金标准，但流程复杂、创伤大、风险高、左右结肠有差异、恐惧意识、人为误差，加之肠镜诊断的准确性和治疗的安全性很大程度上取决于肠道准备的质量等，使肠镜的受检率低于3%，不适合早期筛查。根据我院检测结果，总结如下：

1.资料与方法

1.1患者的一般资料：选自我院2018年1月至2021年9月检测的Septin9基因甲基化检测患者1972例，年龄从25岁至91岁，其中同期健康体检组405例。

1.2方法：根据患者科别进行分组统计阳性率，经过实验技术人员单盲检测，阳性结果进行随访并嘱其进行肠镜检查，通过比较分析Septin9基因甲基化检测和肠镜结果，探讨Septin9基因甲基化检测对结直肠癌的诊治价值。

2.标本采集与制备：

2.1标本采集：用K2EDTA抗凝10ml真空采血管（紫帽），抽取受检者空腹10ml静脉血，上下颠倒抗凝管5-8次，全血标本2-8℃保存，保存不超过4小时，不能冷冻全血标本。

2.2血浆制备流程见下：把装有10ml全血采血管对称放置于型号为DT5-2的离心机里（无刹车）。以1350±150g离心12分钟；从离心机中取出采血管，使用一次性移液管，将血浆转移到一个15ml离心管，再次将装有血浆的15ml离心管,1350±150g离心12分钟，从离心机中取出15ml离心管。使用1-5毫升加样枪，将3.5ml血浆转到一个新的15ml离心管[3]。

2.3标本保存：血浆标本直立冻存在-15至-25℃冰箱中，保证血浆冷冻在管底部，血浆标本不能反复冻融。

3检测方法：

3.1样本提取：

室温溶解样本后按试剂盒说明书进行提取。

裂解：3.5ｍＬ血浆样本、阳性对照品和阴性对照品中分别加入3.5ｍＬ裂解吸附液，涡旋混匀后放置10ｍｉｎ；

ＤＮＡ结合：依次将磁