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土壤硝态氮测定方法

操作步骤：

取5.00g土样，加入50ml2mol/lKCL溶液，振荡1小时，悬液静置3~5min后过滤。测定浸提液在220nm和275nm处吸光度A220和A275。按照下式计算校正吸光度A：

A=A220-2A275

建立A与硝态氮浓度之间的相关曲线，即可计算出浸提液中硝态氮的浓度。

硝酸盐标准曲线制定：

称取0.7220g于105°C烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100ug/ml硝酸盐氮标准溶液。移取该溶液10.00ml于100ml容量瓶，定容，摇匀，即为10ug/ml硝酸盐氮标准溶液。分别取10ug/ml硝酸盐氮标准溶液0、1、2、3、4、5、6、7ml于50ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。用1cm比色皿分别在220nm和275nm处测定吸光度。用公式：A=A220-2A275求的校正吸光度。求此标准曲线方程。

按下式计算硝态氮：硝态氮(mg／kg)=C*V*D／m

式中：C为从标准曲线查得的NO3-—N含量：V为比色测定液总体积(mL)；D为分取倍数；m为鲜土样质量(g)。

方法原理

利用硝酸盐和亚硝酸盐氮在203nm和230nm波长处有较强的紫外吸收峰．利用双波长系数倍率法的公式：AA=Au_KA给硝酸盐氮选择合适的波长对，从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。消除干扰后，硝酸盐氮的含量与△A呈线性关系．线性范围是O～2．0ms／L。由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。

1主要仪器与试剂

UV一24|D1紫外一可见分光光度计(日本岛津公司)；振荡器(振次：243V／rain)；恒温干燥箱；二次蒸馏水器。

硝酸盐氮标准液：称取0．7220g于105℃烘箱中烘2h，干燥冷却后的KNO于小烧杯中，加人二次蒸馏水溶解，定量转人1000mL的容量瓶中，定容．摇匀，即为1001xg／mL硝酸盐氮标准液。移取该溶液10．00mL于100ml容量瓶中．定容，摇匀，即为lOIxg／mL的硝酸盐氮标准使用液。

2吸收曲线与系数K的确定

准确移取101xg／mL的硝酸盐氮标准使用液2．00mL于25mL磨口比色管中，定容，摇匀。用lcm的石英比色皿，以二次蒸馏水作参比．在UV一2401紫外一可见分光光度计上测量不同波长下的吸光度．见图1。选取203nm、23Onm为测试波长，按公式K=AadA进行计算，求得K的平均值为2．75。

3标准曲线的绘制

分别取10．00~gCmL硝酸盐氮标准使用液0，0．25，0．5，1．0，1．5，2．0，2．5mL置于25mL磨121比色管中．各管中加入二次蒸馏水至刻度。摇匀．用UV-2401紫外一可见分光光度计在203nm和230nm处．用1cm石英比色皿测定吸光度。用A旷2．75A的计算方法求得校正吸光度。标准曲线的回归方程为y=0．5283x-0．0009．r=0．9999(n：7）。

4样品测定方法

准确称取lOg充分拌匀的鲜土壤．分别置于100mL具塞三角瓶中，加入0．1gc~so和50．OOmL二次蒸馏水。于振

荡器上振荡10min。放置10min后．将悬液的上部清液用干滤纸过滤．吸取滤液1．00～20．OOmL(视NO3-N的浓度而定，置于25mL磨口比色管中，用水准确稀释至刻度．分别在203nm、230nm波长下测量吸光度，按下式计算硝态氮：硝态氮(mg／kg)=Cx25xD／m

式中：C为从标准曲线查得的NO3-一N含量：25为磨口比

色测定液总体积(mL)；D为分取倍数；m为鲜土样质量(g)。